[發明專利]一種微生物降解植物甾醇生產雄二烯二酮的方法

在審

• 申請號: 202010698933.8
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111808830A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 張保國;劉相岑;袁辰陽;曹慧錦;杜桂林;史吉平
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海高等研究院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/74;C12N1/21;C12P33/02;C12R1/32
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種3-甾酮-△¹-脫氫酶，其特征在于，所述3-甾酮-△¹-脫氫酶的氨基酸序列如SEQID NO：1所示。

2.一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸編碼如權利要求1所述的3-甾酮-△¹-脫氫酶。

3.根據權利要求2所述的一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：28所示。

4.一種重組表達載體，其特征在于，包含如權利要求2或3所述的多核苷酸。

5.根據權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于，包括以下特征中的一項或多項：

1)所述重組表達載體為pMV306；

2)所述重組表達載體包括啟動子，所述啟動子選自Hsp60、Psmyc、pJK-F8和Ymn。

6.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于，所述啟動子選自Hsp60、Psmyc、pJK-F8和Ymn中任意兩個的組合。

7.根據權利要求6所述的重組表達載體，其特征在于，包括以下特征中的一項或多項：

1)所述重組表達載體包括ksdd2、ksdd3、ksddA和ksddP中的任意一個編碼基因；

2)所述重組表達載體包括兩個以上權利要求2或3所述的多核苷酸。

8.一種工程菌，其特征在于，所述工程菌含有如權利要求4～7中任一項所述的重組表達載體或基因組中整合有外源的如權利要求2或3任一項所述的多核苷酸。

9.根據權利要求8所述的一種工程菌，其特征在于，所述工程菌為分支桿菌。

10.一種制備如權利要求1所述的3-甾酮-△1-脫氫酶的方法，包括如下步驟：在合適的條件下培養如權利要求8或9中任一項所述的工程菌，使之表達所述3-甾酮-△^1-脫氫酶，而后分離及純化獲得所述3-甾酮-△¹-脫氫酶。

11.如權利要求1所述3-甾酮-△¹-脫氫酶、如權利要求2或3中任一項所述多核苷酸、如權利要求4～7中任一項所述重組表達載體，或，如權利要求8或9中任一項所述工程菌用于制備雄二烯二酮的用途。

12.一種生成雄二烯二酮的轉化劑，其特征在于，含有如權利要求1所述3-甾酮-△¹-脫氫酶、如權利要求2或3中任一項所述多核苷酸、如權利要求4～7中任一項所述重組表達載體或如權利要求8或9中任一項所述工程菌中的任一項。

13.一種生成雄二烯二酮的方法，其特征在于，包括步驟：將如權利要求1所述的3-甾酮-△¹-脫氫酶作用于雄烯二酮，或，如權利要求8或9中任一項所述工程菌作用于植物甾醇和/或雄烯二酮。