[發(fā)明專利]構(gòu)建HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型的方法、組合物和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010693599.7
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN111778288A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒淑香;謝水林;鄒芬;陳瑩瑩;黃黎珍;游凱欣;姚林敏
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州華騰生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N15/51;A01K67/027
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

1.一種構(gòu)建HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型的方法，其特征在于，采用CRISP/Cas9系統(tǒng)在小鼠基因組Rosa26位點(diǎn)插入HBV表達(dá)盒；其中，所述CRISP/Cas9系統(tǒng)所用的sgRNA的靶序列如SEQ IDNO.1-3任意一者所示，所述HBV表達(dá)盒包括由小鼠白蛋白啟動子驅(qū)動表達(dá)的HBV基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型的方法，其特征在于，所述HBV基因的堿基序列如SEQ ID NO.4所示或與其具有至少80％的同源性且編碼相同的蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型的方法，其特征在于，所述CRISP/Cas9系統(tǒng)所用的同源臂的5’端同源臂堿基序列如SEQ ID NO.6所示，所述同源臂的3’端同源臂堿基序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型的方法，其特征在于，所述CRISP/Cas9系統(tǒng)包括Cas9蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的構(gòu)建HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括：將所述CRISP/Cas9系統(tǒng)導(dǎo)入小鼠ES細(xì)胞；培育所述ES細(xì)胞使其發(fā)育成HBV轉(zhuǎn)基因小鼠。

6.一種用于構(gòu)建HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型的組合物，其特征在于，其包括CRISP/Cas9系統(tǒng)，所述CRISP/Cas9系統(tǒng)包括靶序列為SEQ ID NO.1-3任意一者所示的sgRNA。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于，所述CRISP/Cas9系統(tǒng)還包括Cas9蛋白。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于，所述RISP/Cas9系統(tǒng)還包括同源臂，所述同源臂的5’端同源臂堿基序列如SEQ ID NO.6所示，所述同源臂的3’端同源臂堿基序列如SEQ ID NO.7所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于，所述CRISP/Cas9系統(tǒng)包括：編碼所述sgRNA的第一質(zhì)粒載體、編碼所述Cas9蛋白的第二質(zhì)粒載體以及編碼所述同源臂的第三質(zhì)粒載體。

10.由權(quán)利要求1-5任一項所述的方法所構(gòu)建得到的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型在篩選治療HBV感染疾病的藥物中的應(yīng)用。