[發明專利]核酸樣本檢測方法及裝置、存儲介質及電子設備

在審

• 申請號: 202010692569.4
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN111816256A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 唐向榮
• 申請（專利權）人: 上海康派尼恩醫療科技有限公司
• 主分類號: G16B30/00
• 分類號: G16B30/00;G16B20/10;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京律智知識產權代理有限公司 11438
• 代理人: 孫寶海;闞梓瑄

本公開提供了一種核酸樣本檢測方法、定量檢測方法、循環擴增效率檢測方法及裝置，涉及生物檢測技術領域。通過循環擴增反應基線期熒光值和每輪循環擴增的熒光值，獲取每輪反應的熒光增長效率，并根據不同輪次熒光增長效率的變化率L_n，來獲取核酸樣本循環擴增效率；在絕對定量中，分別獲取標準品和待測樣本擴增效率，結合其各自CT值計算待測樣本的拷貝數；在相對定量中分別獲取標準品、樣本中參照基因、目的基因各自的擴增效率，結合其CT值計算待測樣本中目的基因與參照基因的拷貝數比值。

技術領域

本公開涉及生物檢測技術領域，尤其涉及一種核酸樣本檢測方法、定量檢測方法、循環擴增效率檢測方法及裝置、存儲介質和電子設備。

背景技術

熒光定量qPCR技術(realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR)是核酸檢測和定量分析的革命性突破，1996年由美國應用生物系統(Applied Biosystems)公司推出。它通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監控反應過程，結合相應的軟件對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。qPCR檢測速度快、線性范圍大、通量高、無污染，作為最靈敏的分子生物學檢測技術，從誕生至今，qPCR已經成為生物、醫學研究中應用最廣泛的工具之一。

qPCR的物理基礎是，熒光物質的濃度較低時其熒光強度與該物質的濃度成正比；在循環數達到閾值時，不同初始模板量N₀的DNA均以固定效率指數增長到同一數量N，即N＝N₀*E^CT(E為擴增效率，每一輪DNA數量相對于前一輪DNA數量的比例，CT為熒光增長達到閾值時所對應的循環數)。這一方面極大提高了qPCR的檢測靈敏度，但也造成了qPCR定量檢測的核心問題，就是需要精確地檢測擴增效率，因為擴增效率值的偏差會以指數累積放大從而影響qPCR檢測結果。需要加樣精確，才可通過稀釋度及其與之對應的增減的ΔCT值計算出準確的擴增效率。

但是目前分子生物學實驗設備遠遠滿足不了這樣的精度要求，按照百分比計算，目前微量加樣的STD(Standard Deviation，標準差)5％；而在多數情況下qPCR體系檢測CT值的STD0.2，對應擴增效率檢測的波動可達±4％(如果理論值為1，對應波動為±8％)。

需要說明的是，在上述背景技術部分公開的信息僅用于加強對本公開的背景的理解，因此可以包括不構成對本領域普通技術人員已知的現有技術的信息。

發明內容

本公開的目的在于提供一種核酸樣本檢測方法、定量檢測方法、循環擴增效率檢測方法及裝置、存儲介質和電子設備，至少在一定程度上克服由于相關技術中核酸樣本循環擴增效率檢測不準確的問題。

本公開的其他特性和優點將通過下面的詳細描述變得顯然，或部分地通過本公開的實踐而習得。

根據本公開的一個方面，提供一種核酸樣本循環擴增效率檢測方法，包括：

獲取核酸樣本在循環擴增反應中的熒光基線值F_B；

獲取所述核酸樣本在每輪循環擴增反應的熒光值F_n，其中n＝1，…，N，N為正整數；

根據所述熒光基線值F_B和所述熒光值F_n獲得所述核酸樣本在各輪循環擴增反應的熒光增長效率的變化率L_n；

根據所述核酸樣本在各輪循環擴增反應的熒光增長效率的變化率L_n確定循環擴增反應的最優效率檢測輪次k，k為正整數；

根據(F_k-F_B)/(F_k-1-F_B)獲得所述核酸樣本的擴增效率。