[發明專利]一種短周期高效全雄中華鱉苗種的繁育方法

在審

• 申請號: 202010690852.3
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN111727934A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 張君;趙陽;史新坤;趙林斌
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 合肥和瑞知識產權代理事務所(普通合伙) 34118
• 代理人: 王挺

本發明涉及全雄中華鱉苗種繁育技術，尤其涉及一種短周期高效全雄中華鱉苗種的繁育方法。包括鱉蛋控溫孵化、鱉蛋雌激素處理、稚鱉溫室養殖、偽雌鱉篩選和親鱉塘繁育步驟，其中，鱉蛋控溫孵化中控制鱉蛋孵化溫度為28±1℃；鱉蛋雌激素處理為在中華鱉胚胎孵化的15?18時期，每個時期在最靠近胚胎位置的蛋殼面滴加雌二醇溶液，偽雌鱉篩選采用熒光定量PCR技術。本發明采用性激素滴加誘導偽雌鱉技術，操作簡單，轉化率高，稚鱉溫室養殖大大縮短了性成熟周期，將利用熒光定量PCR技術篩選出的偽雌鱉與原系雄鱉正常交配可達到全雄鱉苗種。本發明提供的全雄中華鱉苗種繁育方法周期短、商品化程度高，可以顯著提高經濟效益。

技術領域

本發明涉及全雄中華鱉苗種繁育技術，尤其涉及一種短周期高效全雄中華鱉苗種的繁育方法。

技術背景

中華鱉(Pelodiscus sinensis)俗稱甲魚，是我國重要的名貴水產養殖品種。中華鱉雄鱉比雌鱉生長速度快，裙邊寬厚，脂肪少，價格高，因此開展中華鱉全雄苗種單性養殖可以顯著提高經濟效益，對中華鱉養殖產業發展具有重大意義。

正常發育中華鱉性別決定屬雌性異配型，即雌鱉性染色體為ZW型，雄鱉性染色體為ZZ型。對早期中華鱉鱉蛋進行17β-雌二醇藥物處理，可以誘導中華鱉未分化的性腺向雌性性腺發育，產生中華鱉性腺為卵巢基因型為ZZ的偽雌鱉。篩選出中華偽雌鱉(ZZ)與原系中華鱉雄鱉(ZZ)進行繁殖，能夠實現全雄鱉繁殖。

目前缺乏經濟、高效的全雄中華鱉苗種繁育技術，尤其對于偽雌鱉的人工誘導方式還比較復雜，轉化率較低；同時對偽雌鱉的鑒定方式也較為復雜，不僅會導致中華鱉死亡，也無法適用于大批量中華鱉樣品鑒定。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種短周期高效全雄中華鱉苗種的繁育方法。

本發明采用了以下技術方案：

一種短周期高效全雄中華鱉苗種的繁育方法，包括以下步驟：

S1.鱉蛋控溫孵化：控制鱉蛋孵化溫室溫度為28±1℃；

S2.鱉蛋雌激素處理：對中華鱉胚胎孵化至15-18時期的鱉蛋，每個時期進行一次藥物處理，所述藥物處理位置是最靠近胚胎的蛋殼面滴加雌二醇溶液；

S3.稚鱉溫室養殖：稚鱉出殼后約1周時間，將稚鱉轉移到溫室成鱉養殖水池，控制水池溫度32攝氏度并每日定時喂食。

S4.偽雌鱉篩選：設定一組中華鱉偽雌鱉性別鑒定引物對，包括一對目的基因18SrRNA和內參基因Gapdh，采用熒光定量PCR反應，利用性成熟的中華鱉表型雌鱉個體的目的基因18S rRNA在W和Z染色體上DNA拷貝數的不同將偽雌鱉篩選出來，所述目的基因18SrRNA和內參基因Gapdh引物均包括F和R兩條引物，所述目的基因18S rRNA和內參基因Gapdh的引物序列如下所示：

表一.引物序列

Table1.Perimer sequences

S5.親鱉塘繁育：將步驟S4鑒定出的偽雌鱉與雄鱉在親鱉塘繁殖得到子代全雄鱉。

優選的，步驟S1鱉蛋控溫孵化中鱉蛋放置在溫室中的孵化箱孵化，所述孵化箱底部預先鋪厚度為5cm的蛭石，調整鱉蛋的動物極向上放置，并在鱉蛋上覆蓋約1cm厚的蛭石，所述蛭石濕度在8-12％RH。

優選的，步驟S2中雌二醇溶液滴加劑量為5μL/次，滴加濃度為50μg/μL，所述雌二醇溶液采用95wt％乙醇為溶劑進行配置。

優選的，步驟S2中中華鱉胚胎孵化時期采用胚胎發育形態特征判斷，所述15-18時期的胚胎發育形態變化特征如下：