[發明專利]一種微孔載體檢測抑制物的測定方法

有效

• 申請號: 202010690586.4
• 申請日: 2020-07-07
• 公開（公告）號: CN111808913B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 張容博;張君成;王忠文;張正淳
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/20
• 分類號: C12Q1/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種微孔載體檢測抑制物的測定方法，其特征在于，在微孔板的微孔內注入40μl的瓊脂培養基制成微孔載體，在微孔載體上載入藥物樣品以及病原菌孢子，檢測藥物對孢子萌發的抑制作用，測定方法的步驟如下：

1)用微孔板制備合格的微孔載體

①微孔板的卡穩：準備一個能將微孔板卡穩及平置的、表面潔凈的卡穩工具，轉入無菌工作臺，將潔凈的微孔板卡于卡穩工具上；

②瓊脂培養基的熔化：取病原菌孢子萌發適用的用三角瓶裝盛的瓊脂培養基加熱熔化；

③培養基的80℃處置：預先將普通水浴鍋加熱恒溫到80℃，將操作②熔化的培養基放入該水浴鍋中，平衡至80℃；

④移液槍無泡移液的處置：把操作③平衡至80℃的培養基轉入無菌工作臺，把移液槍取液量調到40μl，將槍頭伸入80℃的培養基中反復吸排培養基，直至排液操作不出現氣泡現象；

⑤微孔載體的制備：操作④無氣泡現象后，過量按下移液槍吸取培養基，提起槍頭并靠貼在三角瓶瓶口壁上脫除槍頭外部粘附的培養基，再轉移到微孔板的微孔內，注入40μl培養基到微孔底部，并將槍頭留在培養基液內作環轉移動，引導培養基均勻分布于微孔底面，冷卻后形成一個瓊脂培養基的微小平板，作為測試工作用的微孔載體；在注完一個微孔后，母指按住移液槍，返回移到80℃三角瓶培養基中，同樣的吸液操作注制下一個微孔載體，連續操作直到注制的微孔載體數量達到測試需要的數量；

⑥合格微孔載體的標識：將操作⑤注制完畢的微孔板從卡穩工具中取出，在微孔板下方放置一個直線工具，反轉微孔板，把板的底面朝向操作者，透過注制成的微孔載體觀察直線，觀察到直線彎曲或彎折的微孔載體是有氣泡、或者沒有平展的瓊脂塊，屬于不合格的微孔載體，用記號筆在該微孔底部標注，未標注的微孔載體是合格微孔載體；

2)將待測樣品載入微孔載體

將已配備的待檢測的藥物樣品液及測試對照處理樣品液，轉至無菌工作臺，用移液槍吸取樣品液10μl，在槍頭不觸及微孔載體面的情況下點放于步驟1)制備的合格微孔載體表面的中部，讓其自動在微孔載體面上擴展分散，靜置在無菌工作臺讓藥物樣品液干化，成為載藥微孔載體；

3)將病原菌孢子載入微孔載體

無菌條件下，將已備好的病原菌孢子液充分懸浮均勻，用移液槍吸取孢子液1μl，在槍頭不觸及微孔載體面的情況下點放于步驟2)配成的載藥微孔載體的中部，讓孢子液自然分散；

4)孢子萌發培養

將步驟3)操作完畢后的微孔板平置于潔凈的保濕器具內，轉移到培養箱中恒溫培養，直至空白對照處理的孢子充分萌發；

5)結果觀測

從培養箱中取出步驟4)的培養材料，打開保濕器具的蓋子，將載著微孔載體的微孔板倒置放于顯微鏡的載物臺上，將物鏡鏡頭對正微孔底面，調整鏡頭焦點對到微孔載體面的孢子，觀察和記錄各個微孔載體上孢子的萌發情況；根據對照處理的數據，計算所測定藥物對孢子萌發的抑制作用。