[發明專利]柯薩奇病毒A7的病毒樣顆粒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010690365.7
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN112011572B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 朱朗;李雅靜;陰彥輝;馬銘江;呂哲;高強
• 申請（專利權）人: 北京科興生物制品有限公司;北京科興中維生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C07K14/085;G01N33/569;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京睿陽聯合知識產權代理有限公司 11758
• 代理人: 王瑩;張穎

本發明公開了具有免疫原性的柯薩奇病毒A7的病毒樣顆粒，所述病毒樣顆粒具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的P1蛋白和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的3CD蛋白。本發明還公開了所述病毒樣顆粒的制備方法。本發明的病毒樣顆粒具有高的免疫原性，可用于制備預防手足口病的病毒感染的疫苗，還可作為抗原用于制備免疫檢測試劑盒。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及柯薩奇病毒A7的病毒樣顆粒及其制備方法和應用。

背景技術

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，在亞太地區呈周期性爆發，多數手足口病的患兒一周左右自愈，少數患兒可引起肺部并發癥，心肌炎、無菌性腦膜腦炎等并發癥，重癥患兒病情發展快，短時間內可導致死亡。目前對手足口病缺乏有效治療藥物對癥治療，造成我國及周邊國家嚴重的公共衛生問題。

EV，Enterovirus，腸道病毒，腸道病毒又稱腸病毒，是一種主要寄生于腸道的單鏈正義RNA病毒，屬于小RNA病毒科，包括脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒和埃可病毒等，與人類及哺乳動物的傳染性疾病有關。腸道病毒在人群中感染主要表現為類流感癥狀、皰疹性咽峽炎及手足口病等癥狀。

CA，Coxsackievirus groups A，柯薩奇病毒A組，屬于腸道病毒屬，根據乳鼠感染的臨床癥狀與組織病理特性分成A、B兩組。A組目前包含24種血清型，與人類的手足口疾病主要相關。

目前已報道的可引起手足口病的腸道病毒有20多種(型)，包括腸道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)、柯薩奇病毒A組16型(CA16)、CA10、CA6、CA4、CA7和CA14等，以EV71引起的重癥居多。目前針對EV71引起的手足口病的疫苗已成功上市銷售，對由EV71病毒引起的手足口病起到積極的預防作用，但腸道病毒A組病毒抗體之間沒有交叉保護作用。CA7是除EV71和脊髓灰質炎病毒以外與弛緩性麻痹爆發相關的少數腸道病毒之一。

腸道病毒顆粒直徑約為20～30nm，呈現20面體對稱球形，無包膜。病毒衣殼蛋白內部包裹的一條單鏈正義RNA全長約7500bp，由一個開放閱讀框(open reading frame，ORF)和兩端的5’-和3’-非編碼區(untranslated region，UTR)組成。ORF編碼一個較大的多聚前體蛋白，由P1、P2、P3三個前體蛋白組成，P1編碼病毒衣殼的結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，其中VP1包含主要的中和抗原表位所在的區域，P2、P3編碼非結構蛋白，包括2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。腸道病毒家族的前體蛋白的剪切一般為ORF表達的多聚前體蛋白首先裂解為P1、P2、P3，P1經3CD蛋白等的作用繼而裂解為各種衣殼蛋白VP0(約35kDa)、VP1(約32kDa)和VP3(約28kDa)，病毒的衣殼蛋白一般具有天然的自我裝配能力，組裝成病毒顆粒，VP0在核酸存在的情況下進一步裂解為VP2和VP4。腸道病毒一般采用適宜的載體序列同時表達P1和3CD蛋白，不需經過篩選純培養病毒即可獲得具有免疫原性的病毒樣顆粒(virus-likeparticles,VLPs)。VLPs不含有病毒的核酸，因此不能自主復制，沒有感染性，但其形態與天然狀態下的病毒顆粒相同或相似，免疫后可通過和病毒感染相同的途徑呈遞給免疫細胞，有效地誘導機體的免疫系統產生免疫保護反應。

然而，目前本領域還沒有一種有效的針對柯薩奇病毒的理想疫苗。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案。

第一方面，本發明提供一種重組桿狀病毒表達載體。

作為本發明的一個具體實施方式，本發明的重組桿狀病毒表達載體具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或具有分別與SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列互補的序列，或具有分別與SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列具有95％以上同源性的序列。