[發(fā)明專利]一種CircRNA作為肝癌腫瘤標志物的評價方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010671085.1
• 申請日: 2020-07-13
• 公開（公告）號: CN111778334A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉建平;劉尊龍;任飛
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113;C12N5/09;C12N5/071
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

本發(fā)明屬于生物技術(shù)與基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種CircRNA作為肝癌腫瘤標志物的評價方法。本發(fā)明提供的評價方法，以CD90posi細胞亞群的CircRNA作為腫瘤標志物，檢測肝癌患者中腫瘤細胞CD90posi的數(shù)量，進而評價肝癌的嚴重程度。本發(fā)明提供的評價方法，操作過程簡單，可以有效檢測CD90posi細胞的富集程度，為腫瘤檢測提供了一種新技術(shù)，也為腫瘤治療提供了一種新的思路。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)與基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種CircRNA作為肝癌腫瘤標志物的評價方法。

背景技術(shù)

原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高、死亡率高，病死率位居國內(nèi)腫瘤第二位，嚴重威脅人民群眾的生命健康。肝癌起病隱匿，臨床表現(xiàn)缺乏特別性，就醫(yī)時往往處于肝癌中晚期，肝癌早期患者難以發(fā)現(xiàn)，嚴重影響肝癌的治療效果。最新臨床統(tǒng)計顯示，中國每年新發(fā)原發(fā)性肝癌患者80萬左右，占全球的55％；每年因原發(fā)性肝癌死亡數(shù)占全球的45％～50％，而廣東省肝癌死亡率比全國平均水平高50％。

目前肝癌的臨床檢測手段主要通過檢測患者血清甲胎蛋白(AFP)并結(jié)合影像學檢查進行確診，可分為以下幾類：B超檢查受腸氣及周圍臟器的影響，分辨率低，B超引導下進行肝臟病灶穿刺活檢存在一定假陰性率；同時肝臟穿刺存在創(chuàng)面出血、針道轉(zhuǎn)移等嚴重并發(fā)癥。CT或MR僅能分辨直徑1.0cm以上的病灶，且有一定的假陽性率與假陰性率。DSA技術(shù)雖可提高肝癌檢測的準確率，但為侵入性檢查，多用于肝癌治療。

由于血清AFP顯著升高一般出現(xiàn)在腫瘤進展期，且陽性率僅為60-70％，在準確率、檢測效率、診斷擾動后對病人治療風險性和診斷時間的滯后等方面都有明顯的局限性，開發(fā)新的檢測手段有其重要性與迫切性。

近年國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)了一種新型無創(chuàng)檢測手段----液體活檢。肝癌的液體活檢研究主要以循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)甲基化檢測為代表，其本質(zhì)是通過提高痕量檢測的精度增加腫瘤檢測的準確率。申請者認為，尋找并驗證液體活檢新的肝癌分子標志物，如新發(fā)現(xiàn)的CircRNA，是液體活檢一個新的發(fā)展方向。

腫瘤的發(fā)生是多因素協(xié)同作用的結(jié)果。以表觀遺傳為例，基因5’端啟動子區(qū)DNA甲基化能影響啟動子活性，而miRNA則從3’UTR區(qū)發(fā)揮調(diào)控功能，二者既能協(xié)同作用，也能相互制約，研究發(fā)現(xiàn)，約10％的miRNA表達受到DNA甲基化的影響；而circRNA可作為miRNA海綿或緩沖劑，通過吸附或釋放miRNA來影響靶基因表達。而如何利用RNA檢測靶標基因，現(xiàn)有技術(shù)并未給出。

隨著人們生活水平的不斷提高，肝癌患病幾率不斷擴大，如何更好的檢測、治療肝癌逐漸成為一個全民關(guān)注的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)普遍存在的缺陷，提供一種用CircRNA作為肝癌腫瘤標志物的評價方法。本發(fā)明以CircRNA為腫瘤標志物，通過檢測CD90posi細胞的數(shù)量，評價肝癌的患病情況，操作方法簡單，成本低，有利于實際應用，為腫瘤檢測提供了一種新技術(shù)，也為腫瘤治療提供了一種新的思路。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種CircRNA作為肝癌腫瘤標志物的評價方法，所述CircRNA的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

CTTTACAGATACTGTGATACGGATCAGAAACCGACACAATGATGACATTCCCACAATGGCCCAGGGTGTGATTGAATACAAGGAGAGCTTTGGGGTGGATCCTGTCACCAGCCAGAATGTTCAGTACTTTTTGGATCGATTCTACATGAGTCGCATTTCAATTAGAATGTTACTCAATCAGCACTCTTTATTGTTTGGTGGAAAAGGCAAAGGAAGTCCATCTCATCGAAAACACATTGGAAGCATAAATCCAAACTGCAATGTACTTGAAGTTATTAAAG(SEQ ID NO.1)；