[發(fā)明專利]口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010670985.4
• 申請日: 2020-07-13
• 公開（公告）號: CN111662952A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石嵩;劉艷華;張惠媛;高欣;呂雨莎
• 申請（專利權(quán)）人: 北京海關(guān)技術(shù)中心
• 主分類號: C12Q1/14
• 分類號: C12Q1/14;C12N1/20;C12N1/04;C12R1/46;C12R1/19;C12R1/44;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531
• 代理人: 于鵬

1.口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品，其特征在于，包括陰性樣品和陽性樣品，其中，陽性樣品含有基質(zhì)、目標(biāo)菌和干擾菌，陰性樣品含有基質(zhì)和干擾菌；基質(zhì)為口罩，目標(biāo)菌為乙型溶血性鏈球菌，干擾菌為英諾克李斯特氏菌、糞腸球菌、大腸埃希氏菌、頭狀葡萄球菌、蕈狀芽孢桿菌中的一種或多種。

2.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品，其特征在于，樣品中的菌濃度為10³-10⁶cfu/mL。

3.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品，其特征在于，所述陽性樣品的目標(biāo)菌與干擾菌按體積比1:2-3的比例混合成混合菌，添加至基質(zhì)中。

4.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品，其特征在于，所述樣品為凍干樣品，凍干保護(hù)劑含有體積分?jǐn)?shù)為8-10％的海藻糖、體積分?jǐn)?shù)為3-5％的谷氨酸鈉、體積分?jǐn)?shù)為0.5-3％的明膠以及體積分?jǐn)?shù)為2-5％的牛血清白蛋白。

5.如權(quán)利要求4所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品，其特征在于，每個菌種與凍干保護(hù)劑的體積比均為1:9～3:7。

6.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品，其特征在于，所述基質(zhì)的處理方法為：取一次性口罩，剔除掛耳皮筋及金屬鼻托部分，裁剪成小塊，用熱熔封口機(jī)重新封口制成可吸水的再制口罩，再制口罩滅菌后備用。

7.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、菌株復(fù)蘇傳代

將每種菌株進(jìn)行復(fù)蘇，并對復(fù)蘇的菌株進(jìn)行鑒定；

S2、菌株擴(kuò)增

復(fù)蘇后單一的活菌株在36℃±1℃溫度下培養(yǎng)36h，用無菌生理鹽水洗脫，并逐級稀釋至菌濃度為10³-10⁶cfu/mL，按照1:9～3:7的比例與凍干保護(hù)劑混合，制成相應(yīng)單一菌種的凍干菌懸液；

S3、菌懸液配制

陽性樣品按目標(biāo)菌的目標(biāo)濃度10²-10⁵cfu/mL與干擾菌的每種菌目標(biāo)濃度10²-10⁵cfu/mL配制菌懸液，按目標(biāo)菌和干擾菌體積比1:2-3比例混合，制成混合菌懸液，置于磁力攪拌器上不斷攪拌；

陰性樣品的干擾菌按每種菌目標(biāo)濃度10³-10⁶cfu/mL等體積混合，制成混合菌懸液，置于磁力攪拌器上不斷攪拌；

S4、基質(zhì)處理

取一次性口罩，剔除掛耳皮筋及金屬鼻托部分，裁剪成小塊，用熱熔封口機(jī)重新封口制成可吸水的再制口罩，再制口罩滅菌后備用；

S5、凍干

將混合菌懸液滴加在每份口罩基質(zhì)中，待口罩將液體完全吸收后將其裝入樣品瓶中凍干，得到凍干樣品。

8.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品的制備方法，其特征在于，步驟S1中將每種菌株分別接種至哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基，目標(biāo)菌36℃±1℃溫度下厭氧培養(yǎng)36h，干擾菌36℃±1℃溫度下有氧培養(yǎng)36h。

9.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品的制備方法，其特征在于，步驟S2的凍干保護(hù)劑含有體積分?jǐn)?shù)為8-10％的海藻糖、體積分?jǐn)?shù)為3-5％的谷氨酸鈉、體積分?jǐn)?shù)為0.5-3％的明膠以及體積分?jǐn)?shù)為2-5％的牛血清白蛋白。

10.如權(quán)利要求1所述的口罩中溶血性鏈球菌定性檢測能力驗(yàn)證樣品的制備方法，其特征在于，步驟S5中凍干時(shí)間為40-50h。