[發明專利]一種金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法

有效

• 申請號: 202010670621.6
• 申請日: 2020-07-13
• 公開（公告）號: CN111650308B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 鐘可;楊婷婷
• 申請（專利權）人: 貴州中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86;G01N30/34;G01N30/06
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 劉永來

1.金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟(1)：供試品溶液的制備：取金釵石斛花粉末0.4g于錐形瓶中，加入甲醇溶液20mL，超聲處理120min，冷卻至室溫，過濾并取濾液于蒸發皿中，在水浴鍋上以50℃以下低溫蒸干，殘渣加甲醇溶液2mL溶解，移至2mL容量瓶中，加甲醇溶液定容，搖勻即得供試品溶液；

步驟(1.1)：對照品溶液的制備：取D-無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得；

步驟(2)：確定色譜條件：采用尺寸250×4.6mm、粒徑5μm的Agilent SB-C₁₈色譜柱，流動相：乙腈A-0.1％磷酸水溶液B，檢測波長：254nm；流速：0.8mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10uL；流動相梯度洗脫程序的比例按如下設置：0.01～30min，5％-6％A；30～35min，6％-8％A；35～69min，8％-9％A；69～71min，9％-15％A；71～116min，15％-15.5％A；116～118min，15.5％-32％A；118～127min，32％-38％A；127～131min，38％-50％A；131～135min，50％-80％A；135～138min，80％-100％A；

步驟(3)：進行方法學考察；

步驟(4)：指紋圖譜建立及分析：按步驟(1)制備多個批次的金釵石斛花的供試品溶液，將各供試品溶液標定為S1、S2……Sn；將各供試品按步驟(2)的色譜條件進行檢測，將得到的圖譜導入2012版中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統進行分析，建立金釵石斛花的HPLC指紋圖譜；

將對照品溶液按步驟(2)的色譜條件進行檢測，得到D-無水葡萄糖對照品HPLC圖譜；

對12個不同批次黔產金釵石斛花樣品的供試品溶液的HPLC圖譜進行分析，將峰面積較大、分離度較好的色譜峰進行標定，確定26個主要特征峰作為共有峰，將供試品溶液的HPLC圖譜與D-無水葡萄糖對照品HPLC圖譜對比，指認其中26號峰為D-無水葡萄糖，12個批次的金釵石斛花樣品供試品溶液26個特征峰對應的保留時間分別為：1號保留時間為5.080min，2號保留時間為9.502min，3號保留時間為14.168min，4號保留時間為15.479min，5號保留時間為21.606min，6號保留時間為26.502min，7號保留時間為43.082min，8號保留時間為45.393min，9號保留時間為47.405min，10號保留時間為52.640min，11號保留時間為53.879min，12號保留時間為57.850min，13號保留時間為60.378min，14號保留時間為62.318min，15號保留時間為63.691min，16號保留時間為67.302min，17號保留時間為71.014min，18號保留時間為78.228min，19號保留時間為79.164min，20號保留時間為80.950min，21號保留時間為81.867min，22號保留時間為91.847min，23號保留時間為94.598min，24號保留時間為97.585min，25號保留時間為126.604min，26號保留時間為132.731min。

2.根據權利要求1所述的金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于：所述步驟(3)中，包括精密度考察：精密稱定同一樣品粉末，按步驟(1)制備供試品溶液，按步驟(2)下色譜條件檢測，連續進樣6次，記錄色譜圖，以峰型較好，峰面積較大的23號色譜峰為內參比峰，計算共有峰的相對峰面積及相對保留時間的標準偏差值RSD應為0.00％～2.62％和0.00％～0.90％。

3.根據權利要求2所述的金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于：所述步驟(3)中，包括穩定性考察：精密稱定同一樣品粉末，按步驟(1)制備供試品溶液，按步驟(3)下色譜條件檢測，分別在0h、4h、8h、12h、24h、48h進樣，記錄色譜圖，以峰型較好，峰面積較大的色譜峰為內參比峰，計算共有峰的相對峰面積及相對保留時間的標準偏差值RSD應為0.00％～2.69％和0.00％～0.90％。

4.根據權利要求3所述的金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法，其特征在于：所述步驟(3)中，包括樣品重復性考察：精密稱定同一樣品粉末6份，按步驟(1)制備供試品溶液，按步驟(2)下色譜條件檢測，記錄色譜圖，以峰型較好，峰面積較大的色譜峰為內參比峰，計算共有峰的相對峰面積及相對保留時間的標準偏差值RSD應為0.00％～2.95％和0.00％～0.47％。