[發明專利]一種金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法

有效

• 申請號: 202010670621.6
• 申請日: 2020-07-13
• 公開（公告）號: CN111650308B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 鐘可;楊婷婷
• 申請（專利權）人: 貴州中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86;G01N30/34;G01N30/06
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 劉永來

本發明涉及一種黔產道地金釵石斛花HPLC指紋圖譜的構建方法，包括供試品溶液的制備，色譜條件的選擇，并用高效液相色譜儀進行檢測，得到黔產金釵石斛花的指紋圖譜。其中色譜條件為：色譜柱為AgilentSB?C₁₈(250×4.6mm，5μm)，以乙腈?0.1％磷酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測波長為254nm，流速為0.8m L/min，柱溫：30℃，進樣量10μL，使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2012版)對樣品指紋圖譜進行分析，確定26個共有峰,并指認了其中D?無水葡萄糖成分，得到黔產金釵石斛花HPLC指紋圖譜。所建立的黔產金釵石斛花HPLC指紋圖譜特征性強、穩定性高、整體性好，能廣泛應用于黔產金釵石斛花的質量控制和真偽鑒別。

技術領域

本發明涉及黔產金釵石斛花的質量分析領域，具體涉及黔產金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法。

背景技術

金釵石斛(Dendrobium nobile Lindl.)為蘭科石斛屬多年生附生草本植物，以新鮮或干燥莖入藥，其主要有效成分多為多糖、生物堿等物質，有生津益胃，清熱養陰的功效。貴州赤水是金釵石斛的道地產區，采用仿野生栽培技術的金釵石斛，獲得了石斛類國家地理標志保護產品。金釵石斛花中含有多種生物活性成分，多糖、黃酮、揮發油等，有潤肺、增強免疫力、抗衰老等作用，常用作茶飲和保健佳品。長期以來，金釵石斛的研究主要集中在莖上，目前對于金釵石斛花的HPLC指紋圖譜研究未見文獻報道。而市場上金釵石斛花存在真偽混雜、產品質量難以保證等問題。為進一步鑒別金釵石斛花的真偽及控制黔產金釵石斛花的質量，本發明以黔產金釵石斛花為研究對象，首次建立了黔產金釵石斛花的HPLC指紋圖譜，建立的金釵石斛花HPLC指紋圖譜特征性強、穩定性高，整體性好，能廣泛應用于黔產金釵石斛花的質量控制和真偽鑒別。

發明內容

本發明的目的在于提供金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法，以通過建立特征性強、穩定性高，整體性好的金釵石斛花HPLC指紋圖譜，應用于黔產金釵石斛花的質量控制和真偽鑒別。

黔產金釵石斛花的HPLC指紋圖譜構建方法包括如下步驟：

步驟(1)：供試品溶液的制備：取金釵石斛花粉末0.4g于錐形瓶中，加入甲醇溶液20mL，超聲處理120min，冷卻至室溫，過濾并取濾液于蒸發皿中，在水浴鍋上以50℃以下低溫蒸干，殘渣加甲醇溶液2mL溶解，移至2mL容量瓶中，加甲醇溶液定容，搖勻即得供試品溶液；

步驟(2)：確定色譜條件：色譜柱為Agilent SB-C₁₈(250×4.6mm，5μm)，流動相：乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)，檢測波長：254nm；流速：0.8mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10uL。

步驟(3)：進行方法學考察；

步驟(4)：指紋圖譜建立及分析：按步驟(1)制備多個批次的金釵石斛花的供試品溶液，將各供試品溶液標定為S1、S2……Sn；將各供試品按步驟(2)的色譜條件進行檢測，將得到的圖譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2012版)進行分析，建立黔產金釵石斛花的HPLC指紋圖譜。

優選方案一：作為對基礎方案的進一步優化，還包括步驟(3)，流動相梯度洗脫程序具體比例如下設置：0.01～30min，5％-6％A；30～35min，6％-8％A；35～69min，8％-9％A；69～71min，9％-15％A；71～116min，15％-15.5％A；116～118min，15.5％-32％A；118～127min，32％-38％A；127～131min，38％-50％A；131～135min，50％-80％A；135～138min，80％-100％A。