[發明專利]突變的GNAT1蛋白及其在制備靜止性夜盲非人動物模型中的用途

在審

• 申請號: 202010670602.3
• 申請日: 2020-07-13
• 公開（公告）號: CN111848771A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 汪楓樺
• 申請（專利權）人: 朗信啟昇（蘇州）生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/864;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

本發明涉及動物模型領域，具體而言，涉及一種突變的GNAT1蛋白及其在制備靜止性夜盲非人動物模型中的用途。本發明提供的突變的GNAT1蛋白，可用于構建靜止性夜盲動物模型，為進一步深入系統研究靜止性夜盲疾病奠定了基礎，還可以用于GNAT1靜止性夜盲的藥物篩選。

技術領域

本發明涉及動物模型領域，具體而言，涉及一種突變的GNAT1蛋白及其在制備靜止性夜盲非人動物模型中的用途。

背景技術

先天性靜止性夜盲(Congenital stationary night blindness,CSNB)是一類主要損壞視網膜桿體系統功能的遺傳性視網膜疾病。臨床特點為先天性的非進行性夜盲，以視桿細胞的功能異常為主要癥狀，從而導致夜視力受損，而明視覺通常并無明顯異常特征，伴有或者不伴有斜視、屈光不正和眼球震顫等臨床表現，其暗適應及視網膜電圖(ERG)發生特征性的改變。生物學研究認為CSNB患者存在有神經元(突觸)傳遞的異常和生物信號的傳導缺損，而其視網膜及視網膜色素上皮的組織形態學檢查正常。目前對該病的病因和病理機制缺乏深入的系統研究，突變基因的致病機制尚不明確，給針對性的發展治療干預措施帶來障礙。

CNSB防治措施的乏力根本原因在于對該病的病因和病理機制缺乏深入系統的研究，造成何種困境的主要原因有以下幾個方面：1)臨床表型異質性強。該病的臨床表型差異大，分為眼底正常、眼底異常和伴有近視和眼球震顫及視力下降的CSNB，而根據ERG分為Schubert-Bornschein型和Riggs型。這一特征給傳統的診斷方法帶來巨大挑戰。2)致病基因、遺傳模式多樣。在遺傳學上CNSB可劃分為常染色體顯性遺傳，常染色體隱性遺傳和性連鎖型3種類型。現已發現3個與CSNB相關的基因，他們分別是鳥嘌呤核苷酸結合蛋白α轉導活性肽1(Guanine nucleotide binding protein,αtransducing activity polypeptidel,GNAT1)基因、RHO基因和磷酸二酯酶β(PDE68)基因。因此尋找新的致病基因，并明確其致病機制是對于該疾病研究的首要解決問題。3)致病分子機制復雜。目前國外這方面研究較為活躍，國內相關研究極少，幾乎沒有從DNA分子水平上去研究此病的分子技術，更沒有針對致病機理的研究，這給治療帶來了諸多困難。

GNAT1屬于G蛋白超家族中的Gt蛋白，是光感受器視覺光電轉導系統中的轉換器，與RHO、PDE組成一個G蛋白偶聯的信號轉導系統。其中G蛋白是一個分子開關，轉導出RHO接收的視覺信號，再以G蛋白解離亞基作為傳導物，活化PDE和cGMP濃度，從而引起視桿細胞內相應的反應。我們結合臨床發現的新GNAT1突變位點，該模型的建立對深入研究GNAT1突變導致的靜止性夜盲致病機制有極大幫助。

目前尚缺乏GNAT1突變導致的靜止性夜盲動物模型。有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明針對常染色體顯性遺傳CSNB的GNAT1新突變位點建立了一種新的動物模型，為進一步深入系統研究靜止性夜盲疾病。

具體的，本發明涉及一種突變的GNAT1蛋白，相對于人野生型GNAT1蛋白，其第57位氨基酸由酪氨酸突變為天冬氨酸。

該突變蛋白可用于制備靜止性夜盲非人動物模型。

本發明還涉及分離的核酸，其編碼如上所述的突變型的GNAT1蛋白。

本發明還涉及載體，其包含如上所述的核酸。

可選的，所述載體為AAV載體。

可選的，所述載體為AAV2載體。

本發明還涉及一種宿主細胞，其包含如上所述的核酸或如上所述的載體。

另外，本發明還涉及一種制備靜止性夜盲非人動物模型的方法，其包括采用轉基因方法使得所述動物的視網膜感光細胞中表達如上所述的突變的GNAT1蛋白的步驟。