[發(fā)明專利]以N基因為基礎的NASBA技術檢測新冠病毒核酸試劑盒及其檢測方法

在審

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• 申請日: 2020-07-10
• 公開（公告）號: CN111778356A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設計）人: 滕新棟;張瑾;趙風源;劉海江;陳曉光;張娟;梁潔;郭寧;孫燕茹
• 申請（專利權）人: 青島國際旅行衛(wèi)生保健中心(青島海關口岸門診部)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6865;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京開林佰興專利代理事務所(普通合伙) 11692
• 代理人: 劉帥帥

本發(fā)明公開了一種以N基因為基礎的NASBA技術檢測新冠病毒核酸試劑盒及其檢測方法，屬于病原體檢測領域，是根據(jù)新冠病毒N基因序列設計特異性擴增引物，利用NASBA反應體系檢測新冠病毒核酸。本發(fā)明能實現(xiàn)對新冠病毒快速、靈敏、特異、準確的檢測。

技術領域

本發(fā)明涉及一種病原體檢測領域，具體涉及一種以N基因為基礎的NASBA技術檢測新冠病毒核酸試劑盒及其檢測方法。

背景技術

冠狀病毒（Coronavirus，CoV）是一類嚴重危害人類和畜禽健康的致病微生物，普遍存在于自然界中，自然宿主包括人、牛、豬、犬、禽、貓、蝙蝠、鼠等，廣泛宿主特點和自身基因組結構使其演變過程中較易發(fā)生基因變化，呈現(xiàn)基因遺傳多樣性，新冠狀病毒和亞型不斷出現(xiàn)。

本發(fā)明設計一種以N基因為基礎的NASBA技術檢測新冠病毒核酸試劑盒及其檢測方法，靈敏、準確、可測低滴度新冠病毒核酸，能有效應用于口岸的檢測，為口岸提供堅實的技術支持和技術儲備。

發(fā)明內(nèi)容

針對新冠病毒的實際需求，本發(fā)明提供一種以N基因為基礎的NASBA技術檢測新冠病毒核酸試劑盒，其特點是根據(jù)新冠病毒N基因序列設計特異性擴增引物，利用NASBA反應體系檢測新冠病毒核酸。能實現(xiàn)對新冠病毒快速、靈敏、特異、準確的檢測。并提供其檢測方法。

本發(fā)明是由以下技術方案來實現(xiàn)的：

本發(fā)明設計了一組以N基因為基礎的NASBA技術檢測新冠病毒核酸序列特異性擴增引物，序列如下：

F：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGTGATGCTGCTCTTGCTT

R：TTCCTTGGGTTTGTTCTG。

本發(fā)明還設計了一種以N基因為基礎的NASBA技術檢測新冠病毒核酸試劑盒，包括如下成分：

1）新冠病毒N基因序列檢測特異性擴增引物

F：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGTGATGCTGCTCTTGCTT

R：TTCCTTGGGTTTGTTCTG。

2）NASBA反應體系：

反應液Ⅰ（20 μL）：

10 ×NASBA buffer［40 mmol /L Tris-HCl（pH 8.5， 25℃），100 mmol/L KCl，12mmol/L MgCl₂，5 mmol/L DTT］2.0 μL，

DMSO 2.5 μL，

模板RNA 5 μL，

引物F( 10 μmol /L) 0.5 μL，

引物R( 10 μmol /L) 0.5 μL，

dNTPs ( 2.5 mmol /L) 0.5 μL，

NTPs ( 2.5 mmol /L) 1.0 μL，

用水補至20 μL。

反應液Ⅱ（5 μL）:

10 ×NASBA buffer［40 mmol /L Tris-HCl（pH 8.5，25℃），100 mmol/L KCl，12mmol/L MgCl₂，5 mmol/L DTT］0.5 μL，

BSA( 20 mg /ml) 0.125 μL，

T7 RNA 聚合酶( 50000 U /mL) 0.8 μL，