[發(fā)明專利]一種PCR隨機(jī)引物和使用其構(gòu)建靶向測(cè)序文庫(kù)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010659213.0
• 申請(qǐng)日: 2020-07-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111826421B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳敬臣;蔡興盛;鄧泱泱;李夢(mèng)真;高凇澤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州邁景基因醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806;C12Q1/686;C12N15/10;C40B50/06;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 景鵬;何爽

1.一種PCR隨機(jī)引物，其特征在于，所述PCR隨機(jī)引物從5’端到3’端依次包括成環(huán)互補(bǔ)序列、通用序列、UMI序列、UMI定位點(diǎn)和隨機(jī)序列，其中，所述成環(huán)互補(bǔ)序列與所述通用序列中連接UMI序列端的部分序列反向互補(bǔ)；

所述成環(huán)互補(bǔ)序列如SEQ ID NO: 1所示；

所述通用序列如SEQ ID NO: 6所示；

所述UMI定位點(diǎn)如SEQ ID NO: 10所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR隨機(jī)引物，其特征在于，所述UMI序列的長(zhǎng)度為4~20 bp。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR隨機(jī)引物，其特征在于，所述隨機(jī)序列的長(zhǎng)度為5~15 bp。

4.一種試劑盒，其特征在于，包括如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的PCR隨機(jī)引物。

5.一種非診斷治療目的的PCR擴(kuò)增方法，其特征在于，包括用如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的PCR隨機(jī)引物或如權(quán)利要求4所述的試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

6.一種非診斷治療目的的構(gòu)建靶向測(cè)序文庫(kù)的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）將片段化的待測(cè)基因組DNA與如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的PCR隨機(jī)引物混合，變性后，迅速冷卻處理；

2）將核苷酸單體混合物、核酸聚合酶、緩沖液，和步驟1）的產(chǎn)物混合，進(jìn)行第一輪PCR擴(kuò)增；

3）將第一輪PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物作為模板，利用特異性引物進(jìn)行第二輪PCR擴(kuò)增。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的構(gòu)建靶向測(cè)序文庫(kù)的方法，其特征在于，步驟3）中，將第一輪PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物作為模板，利用特異性引物、5’接頭引物和3’接頭引物進(jìn)行第二輪PCR擴(kuò)增。