[發明專利]一種HTLV-1 Env介導的細胞-細胞融合模型、制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010658045.3
• 申請日: 2020-07-09
• 公開（公告）號: CN111778279B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 段良偉;王輝;鄭前前;張赟;牛玉娜;張陽
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/62;C12N15/10;C12N15/07;C12Q1/6897
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發明屬于生物醫學技術領域，尤其涉及一種HTLV?1?Env介導的細胞?細胞融合模型、制備方法及應用。本申請中獲得HTLV?1?Env基因片段，并替換載體pSRHS?Tat?Envsubgt;HIV?1/subgt;的HIV?1?Env基因中對應的gp145片段，轉染效應細胞COS?1，并與基因組中整合有LTR及其下游串聯著的螢火蟲熒光素酶報告基因的TZM?bl細胞共培養；通過檢測螢火蟲熒光素酶的活性間接檢測HTLV?1?Env介導的細胞?細胞融合能力。利用抑制多肽P?400的對該融合系統進行驗證，表明該系統非常適用于針對HTLV?1病毒進入抑制劑的篩選和驗證，以及對進入抑制劑有效濃度和毒性等指標進行評估。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，尤其涉及一種HTLV-1?Env介導的細胞-細胞融合模型、制備方法及應用。

背景技術

人類T淋巴細胞白血病1型病毒(HTLV-1)，最先由美國國立癌癥研究所的羅伯特·蓋洛研究組于1980年報道發現，為首個證明與人類癌癥直接相關的逆轉錄病毒。目前全球范圍內的感染者超千萬，其感染可誘發成人T細胞白血病(ATL)和HTLV-1相關脊髓病變(HAM)/熱帶痙攣性下肢輕癱(也稱為強直性下肢輕癱，TSP)等多種疾病。盡管經過40年的研究，但至今仍沒有針對HTLV-1感染的特效療法和安全持久有效的疫苗制劑，HTLV-1感染仍是嚴重威脅人類健康的地方性流行病，并給全球社會經濟發展造成很大壓力。

進入抑制劑是一類重要的抗包膜病毒藥物，它在病毒感染早期階段阻斷病毒復制的中心環節——入侵靶細胞，既能預防病毒感染，也能阻止病毒感染新的宿主細胞，降低血漿中的病毒載量，具有明顯的優越性，越來越受到科研人員和藥物研發人員的關注和重視，具有成為HTLV-1病毒感染有效療法的潛力。新的強效進入抑制劑的篩選和鑒定對于人類的健康與社會的發展有著重要意義。

病毒是結構極其簡單的微生物，無完整的代謝酶系統，需要借助宿主細胞合成自身物質，進而完成自身的生命周期。HTLV-1也是一種包膜病毒(又稱囊膜病毒)，首先要通過膜融合入侵到宿主細胞內才能起始新的生命周期，因而是整個病毒復制周期的首要環節。包膜病毒一般通過兩種方式進入宿主細胞。第一種方式，位于病毒表面的包膜糖蛋白與受體結合，誘導構象變化，導致病毒包膜和宿主細胞膜在細胞表面直接融合。第二種方式，病毒通過內吞途徑入侵細胞，定位于胞內體，以pH和(或)蛋白酶依賴的方式觸發包膜糖蛋白的構象變化，從而觸發膜融合。

很久之前科研人員就發現，與人類免疫缺陷病毒1型(HIV-1)不同，游離的HTLV-1病毒粒子對CD4⁺T淋巴細胞的感染效率十分低下，這種情況適用于除樹突細胞以外的大多數HTLV-1靶細胞類型。近期的研究發現，游離的HTLV-1病毒粒子可以高效地感染樹突細胞。同時，被感染的樹突細胞可以快速地、重復性地將HTLV-1轉移給自體CD4⁺T細胞，造成CD4⁺T細胞的長期多產性感染，并導致T細胞的白介素-2非依賴性的轉化。樹突細胞作為重要的抗原呈遞細胞，被認為是多種病原入侵后最先遭遇的細胞，因而很可能在HTLV-1的傳播過程中起著關鍵作用。Alais等人通過精巧的實驗證明了樹突細胞比自體淋巴細胞對HTLV-1的感染更敏感，并可有效地將病毒傳遞給淋巴細胞。因而，樹突細胞作為體內最先被HTLV-1感染的細胞，它很可能代表著一個真正的病毒庫。