[發明專利]一種HTLV-1 Env介導的細胞-細胞融合模型、制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010658045.3
• 申請日: 2020-07-09
• 公開（公告）號: CN111778279B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 段良偉;王輝;鄭前前;張赟;牛玉娜;張陽
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/62;C12N15/10;C12N15/07;C12Q1/6897
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.一種重組HTLV-1?Env表達質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

利用滾環PCR技術將質粒pSRHS-Tat-Env_HIV-1?CRF07中HIV-1?Env中對應的gp145片段后面第一個氨基酸殘基突變成終止密碼子，獲得突變體；用HTLV-1?Env全長片段替換所述突變體的HIV-1?Env基因的gp145片段，獲得重組HTLV-1?Env表達質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1；獲得重組HTLV-1?Env表達質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1后轉化至Top10感受態細胞中；

所述HTLV-1?Env片段核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示；所述gp145片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

所述滾環PCR技術涉及的點突變引物序列見SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3所示；

滾環PCR法點突變反應體系：

；

滾環PCR法點突變反應條件：

。

2.一種按照權利1所述的重組HTLV-1?Env表達質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1的構建方法構建的質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1。

3.如權利要求2所述的質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1在HTLV-1?Env介導的細胞-細胞融合體系中的應用。

4.如權利要求2所述的質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1在針對HTLV-1病毒的進入抑制劑篩選和/或驗證方面的應用，該應用僅用于非疾病治療及診斷目的。

5.一種HTLV-1?Env介導的細胞-細胞融合體系，其特征在于，包括：效應細胞COS-1，權利要求2所述的質粒pSRHS-Tat-Env_HTLV-1以及靶細胞TZM-bl。

6.如權利要求5所述的HTLV-1?Env介導的細胞-細胞融合體系在針對HTLV-1病毒的進入抑制劑篩選和/或驗證方面的應用，該應用僅用于非疾病治療及診斷目的。