[發(fā)明專利]一種完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的凍結(jié)肩動物模型建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010655950.3
• 申請日: 2020-07-09
• 公開（公告）號: CN111812314B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 潘界恩;陳剛;蔡震海;黃成龍;范國明
• 申請（專利權(quán)）人: 嘉興市第二醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N33/535;G01N1/30;G01N1/36;G01N21/84
• 代理公司: 嘉興啟帆專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33253
• 代理人: 程開生

本發(fā)明公開了一種完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的凍結(jié)肩動物模型建立方法，包括以下步驟：步驟S1：首先用彎剪剪除動物右肩部外側(cè)預(yù)設(shè)區(qū)域的毛，然后使動物俯臥，將兩后肢和左前肢固定于臺上，注射部位周圍的皮膚用75％酒精消毒，然后注入50μLCFA，通過將完全弗氏佐劑注射到單肩關(guān)節(jié)腔中誘導(dǎo)肩關(guān)節(jié)炎，對照動物類似地注射無菌生理鹽水，第一次注射CFA當(dāng)日記為實驗第1天，分別在第1天，第4天，第7天，第13天注射CFA。本發(fā)明公開的完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的凍結(jié)肩動物模型建立方法，有助于解決現(xiàn)有的誘導(dǎo)腳踝關(guān)節(jié)炎癥的動物模型的缺點，成功建立具有炎癥基礎(chǔ)的肩關(guān)節(jié)疼痛模型。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的凍結(jié)肩動物模型建立方法。

背景技術(shù)

凍結(jié)肩又稱肩周炎，是由多種病因?qū)е碌臐u進性發(fā)展的肩關(guān)節(jié)囊炎性粘連、僵硬。主要表現(xiàn)為肩關(guān)節(jié)周圍持續(xù)的疼痛和肩關(guān)節(jié)功能障礙，引發(fā)生理和心理雙重不適，嚴重影響患者的正常生活和工作。凍結(jié)肩是肩部常見疾病之一，發(fā)病年齡集中在50～70歲，其中以50歲左右最為高發(fā)。

由于凍結(jié)肩疼痛機制尚未明確，臨床中對凍結(jié)肩疼痛的治療多為對癥治療，效果多不理想。慢性疼痛和炎癥是肩周炎的主要臨床表現(xiàn)，其發(fā)病作用的潛在機制仍未明了。很多研究是對于腳踝關(guān)節(jié)炎研究，涉及肩周炎的研究甚少，尤其是需要建立一種可靠地肩周炎動物模型，為開發(fā)新型藥物以治療和改善凍結(jié)肩疼痛具有潛在的臨床應(yīng)用價值。因此，研究有必要建立肩周炎的動物模型，但目前尚無成功的范例。

建立用于研究肩周炎動物模型，需要從兩方面入手，一方面，需在實驗動物的肩部組織上誘導(dǎo)出炎癥，建立炎癥模型；另一方面,需要在實驗動物上誘導(dǎo)出慢性肩關(guān)節(jié)疼痛。兩方面相結(jié)合,方可建立具有炎癥基礎(chǔ)的肩關(guān)節(jié)動物模型。

通過將CFA注入肩關(guān)節(jié)腔內(nèi)，可在動物肩部誘導(dǎo)炎癥。每隔4天注射一次，連續(xù)4次，可導(dǎo)致肩部組織持續(xù)炎癥和疼痛，進而導(dǎo)致慢性疼痛。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的狀況，克服需要解決的技術(shù)問題，即針對現(xiàn)有的誘導(dǎo)腳踝關(guān)節(jié)炎癥的動物模型的缺點，提供一種完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的凍結(jié)肩動物模型建立方法，該方法將炎癥模型和疼痛模型相結(jié)合，成功建立了具有炎癥基礎(chǔ)的肩關(guān)節(jié)疼痛模型。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案，所述完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的凍結(jié)肩動物模型建立方法，包括以下步驟：

步驟S1：首先用彎剪剪除動物右肩部外側(cè)預(yù)設(shè)區(qū)域的毛，然后使動物俯臥，將兩后肢和左前肢固定于臺上，注射部位周圍的皮膚用75％酒精消毒，然后注入50μLCFA，通過將完全弗氏佐劑(CFA，Sigma)注射到單肩關(guān)節(jié)腔中誘導(dǎo)肩關(guān)節(jié)炎，對照動物類似地注射無菌生理鹽水，第一次注射CFA當(dāng)日記為實驗第1天，分別在第1天，第4天，第7天，第13天注射CFA；

步驟S2：利用ELISA檢測方法、HE染色方法或者Masson染色方法中的一種或者多種方法判斷是否成功建立凍結(jié)肩動物模型。

進一步地，作為上述技術(shù)方案的進一步優(yōu)選技術(shù)方案，步驟S1中，預(yù)設(shè)區(qū)域優(yōu)選為6cm×6cm。

進一步地，作為上述技術(shù)方案的進一步優(yōu)選技術(shù)方案，步驟S2中，所述ELISA檢測方法具體實施為以下步驟：

基于TNF-α和IL-6炎癥因子：實驗第15天，采用耳緣靜脈麻醉(10％水合氯醛，2mL/kg體重)，麻醉完全后，將動物仰臥固定，采用耳緣靜脈取血5mL，將收集于離心管的全血標本在室溫靜置2h，然后3000rpm離心15min，取上清，分裝，-80℃保存(待測，采用ELISA法進行檢測)。

進一步地，作為上述技術(shù)方案的進一步優(yōu)選技術(shù)方案，步驟S2中，所述ELISA檢測方法進一步實施為以下步驟：

步驟P2.1：血清分離：將收集于離心管的全血標本在室溫靜置2h，然后2-8℃3000rpm離心15min，取上清，分裝，-80℃保存，解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測；