[發(fā)明專利]乳腺癌早期篩查的分子標(biāo)志物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010650699.1
• 申請(qǐng)日: 2020-07-08
• 公開（公告）號(hào): CN111766386B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱長軍;袁增強(qiáng);張杰;廖亞金
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京凱弗生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;C07K16/30;C07K16/06
• 代理公司: 北京慧而行專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11841
• 代理人: 李銳

本發(fā)明涉及一種用于乳腺癌早期篩查的分子標(biāo)志物，所述的分子標(biāo)志物是磷酸化的抗原片段，其序列如SEQ ID NO.1所示，并且該抗原中的絲氨酸殘基為磷酸化的殘基。所述的乳腺癌包括Luminal A、Luminal B、HER2陽性和三陰性乳腺癌。本發(fā)明還涉及能夠識(shí)別所述分子標(biāo)志物的檢測試劑及包含所述的檢測試劑的檢測試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的，涉及一種乳腺癌早期篩查的分子標(biāo)志物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

基因組不穩(wěn)定是腫瘤細(xì)胞重要的標(biāo)志，引起基因組不穩(wěn)定的原因是細(xì)胞周期調(diào)控、DNA復(fù)制以及DNA損傷修復(fù)分子通路中的相關(guān)蛋白發(fā)生突變或者錯(cuò)誤表達(dá)導(dǎo)致其功能異常所致。P53結(jié)合蛋白1(53BP1)是Iwabuchi等在1994年通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩選出來的與P53相互結(jié)合的蛋白，其基因定位在染色體15號(hào)染色體長臂，全長6.6kb，編碼1972個(gè)氨基酸，蛋白分子量為217kDa。53BP1作為在修復(fù)DNA雙鏈損傷(DSB)途徑中發(fā)揮重要作用的蛋白分子，能在DSB發(fā)生后第一時(shí)間被蛋白激酶ATM磷酸化且聚集在DNA損傷處，是公認(rèn)的DNA雙鏈損傷的標(biāo)志分子之一。ATM磷酸化53BP1聚集在DNA損傷位點(diǎn)，阻止DNA雙鏈損傷的正常修復(fù)，最終引起細(xì)胞基因組不穩(wěn)定，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。

乳腺癌是一種常發(fā)生于乳腺上皮組織的最常見的婦科惡性腫瘤，影響著全世界女性的身心健康以及生活質(zhì)量和生命安全。按照乳腺癌細(xì)胞表面雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長因子2受體(HER-2)等表達(dá)的不同，可將乳腺癌分為Luminal A、LuminalB、HER2陽性和三陰性等類型。LuminalA型乳腺癌的特點(diǎn)表現(xiàn)為：ER+、和/或PR+、HER2-，是最為常見的激素受體呈陽性的乳腺癌，占所有侵潤性癌的30％-40％。Luminal B型乳腺癌的特點(diǎn)表現(xiàn)為：ER+、和/或PR+、HER2+。該亞型乳腺癌患者，絕經(jīng)前者所占比例較低。HER2過表達(dá)型乳腺癌的特點(diǎn)表現(xiàn)為：ER-、PR-、HER2+。該亞型乳腺癌較其他亞型乳腺癌所占比例較少，僅為6.7％。三陰性乳腺癌(Triple-Negative Breast Cancer，TNBC)的特點(diǎn)表現(xiàn)為：ER-、PR-、HER2-，該亞型乳腺癌所占比例為20％。乳腺癌種類多，危害極大，但目前仍缺少特異性早期分子診斷的方法。

我們檢測乳腺癌組織中53BP1蛋白的磷酸化水平，結(jié)果顯示磷酸化53BP1可作為診斷乳腺癌的分子標(biāo)志物。以磷酸化53BP1為靶點(diǎn)的乳腺癌分子診斷試劑盒可以應(yīng)用于乳腺癌的篩查和診斷，因而有著重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和廣闊的市場前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明首先涉及一種用于乳腺癌早期篩查的分子標(biāo)志物，所述的分子標(biāo)志物是磷酸化的抗原片段，其序列如SEQ ID NO.1所示，并且該抗原中的絲氨酸殘基為磷酸化的殘基。

所述的乳腺癌包括Luminal A、Luminal B、HER2陽性和三陰性乳腺癌。

SEQ ID NO.1：CIED(pS)QPE(pS)QVLEDD，其中的(pS)為磷酸化的絲氨酸；

本發(fā)明還涉及能夠識(shí)別所述分子標(biāo)志物的檢測試劑，所述的檢測試劑包括，

(1)特異性結(jié)合所述分子標(biāo)志物的抗體，所述的抗體包括但不限于多克隆抗體、單克隆抗體、單鏈抗體、功能性抗體片段、抗體Fab區(qū)，納米抗體、嵌合抗體、多特異性抗體；

(2)特異性結(jié)合所述分子標(biāo)志物的配體蛋白或多肽；

(3)特異性識(shí)別所述分子標(biāo)志物的非蛋白類化合物；

本發(fā)明還涉及一種制備檢測所述分子標(biāo)志物的多克隆抗體的制備方法，所述的方法包括如下步驟：

(1)將所述的磷酸化的抗原片段偶聯(lián)至載體蛋白上；

(2)將抗原與佐劑1：1混勻后，免疫新西蘭兔。具體方法如下：