[發(fā)明專利]乳腺癌早期篩查的分子標志物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010650699.1
• 申請日: 2020-07-08
• 公開（公告）號: CN111766386B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱長軍;袁增強;張杰;廖亞金
• 申請（專利權(quán)）人: 南京凱弗生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;C07K16/30;C07K16/06
• 代理公司: 北京慧而行專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11841
• 代理人: 李銳

1.一種用于乳腺癌早期篩查的分子標志物，所述的分子標志物是磷酸化的抗原片段，

所述的磷酸化的抗原片段序列為：CIED(pS)QPE(pS)QVLEDD，其中的pS為磷酸化的絲氨酸；

所述的乳腺癌包括Luminal A、Luminal B、HER2陽性和三陰性乳腺癌。

2.一種制備檢測權(quán)利要求1所述分子標志物的多克隆抗體的制備方法，所述的方法包括如下步驟：

(1)將所述的磷酸化的抗原片段偶聯(lián)至載體蛋白上；

(2)將抗原與佐劑混勻，皮下注射入新西蘭大白兔背部免疫步驟為：

1)第一次免疫將200μg抗原多肽與1ml弗氏完全佐劑混勻，背部皮下注射于西新蘭大白兔；

2)一周后第二次免疫：抗原多肽降至100μg，佐劑轉(zhuǎn)換為弗氏不完全佐劑，兩周后耳緣靜脈取血驗證抗體效價；

3)再過一周后開始下一次免疫，免疫方法同第二次免疫，直至得到高效價的抗體血清；

(3)血清抗體效價驗證得到高滴度特異性抗磷酸化53BP1抗體后，得到抗血清。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，

步驟(3)所述的血清抗體效價驗證具體方法為：將收集的抗血清與體外培養(yǎng)的約10000個MFC-7腫瘤細胞株的總蛋白提取物進行蛋白印跡雜交，能夠清晰的標記出細胞內(nèi)磷酸化53BP1蛋白時，即為效價合格。

4.一種用于乳腺癌早期篩查的檢測試劑盒，所述的試劑盒包含能夠識別權(quán)利要求1所述分子標志物的檢測試劑，

所述的檢測試劑為根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法制備得到的多克隆抗體；

所述的乳腺癌包括Luminal A、Luminal B、HER2陽性和三陰性乳腺癌。