[發(fā)明專利]FBXO38蛋白在制備NSCLC預(yù)后評(píng)估試劑或者試劑盒中的應(yīng)用方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010639243.5
• 申請(qǐng)日: 2020-07-09
• 公開（公告）號(hào): CN111735947A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦思達(dá);楊成成;張伯翔;吳潔;成浩;馬姣;任宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/573
• 代理公司: 西安匠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61255
• 代理人: 趙亞飛

1.一種FBXO38蛋白在制備NSCLC預(yù)后評(píng)估試劑或者試劑盒中的應(yīng)用方法，其特征在于：該應(yīng)用方法包括以下步驟：

1)將FBXO38蛋白作為分子標(biāo)記，利用FBXO38一抗、HRP標(biāo)記二抗以及免疫組化實(shí)驗(yàn)試劑，檢測(cè)FBXO38蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)量；

2)根據(jù)FBXO38蛋白表達(dá)量的高低來(lái)評(píng)估患者術(shù)后預(yù)后生存期。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的FBXO38蛋白在制備NSCLC預(yù)后評(píng)估試劑或者試劑盒中的應(yīng)用方法，其特征在于：所述步驟1)中FBXO38一抗指兔抗人FBXO38多克隆抗體，HRP標(biāo)記二抗指辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記鼠抗兔IgG抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的FBXO38蛋白在制備NSCLC預(yù)后評(píng)估試劑或者試劑盒中的應(yīng)用方法，其特征在于：所述步驟1)中免疫組化實(shí)驗(yàn)試劑包括二甲苯、乙醇、3％H₂O₂溶液、1％BSA封閉液、DAB顯色試劑、蘇木素。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的FBXO38蛋白在制備NSCLC預(yù)后評(píng)估試劑或者試劑盒中的應(yīng)用方法，其特征在于：所述步驟1)中NSCLC組織為福爾馬林固定后石蠟包埋的NSCLC組織。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的FBXO38蛋白在制備NSCLC預(yù)后評(píng)估試劑或者試劑盒中的應(yīng)用方法，其特征在于：所述步驟1)中檢測(cè)FBXO38蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)量的具體方法如下：

1.1)用福爾馬林固定NSCLC組織標(biāo)本，酒精脫水和二甲苯透明后石蠟包埋并切片；

1.2)50℃烘烤2h后，切片用二甲苯脫蠟，梯度酒精水化；

1.3)3％H₂O₂溶液孵育10min，蒸餾水沖洗、PBS緩沖液2次×5min

1.4)0.01M的檸檬酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，微波爐98℃加熱10min；

1.5)冷卻至室溫后，PBS緩沖液2次×5min；

1.6)1％BSA封閉1h后，一抗孵育：加兔抗人FBXO38多克隆抗體，4℃冰箱過(guò)夜，至少12h；

1.7)室溫放置復(fù)溫20min，PBS緩沖液2次×5min；

1.8)二抗孵育：加入相應(yīng)的辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記鼠抗兔IgG抗體，37℃孵育30min；

1.9)PBS緩沖液2次×5min；DAB試劑盒進(jìn)行顯色1-10min；

1.10)自來(lái)水充分沖洗終止染色；蘇木素進(jìn)行復(fù)染10s；

1.11)梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片后風(fēng)干；

1.12)顯微鏡下觀察結(jié)果，隨機(jī)選取10個(gè)區(qū)域，進(jìn)行評(píng)分；

1.13)根據(jù)染色強(qiáng)弱評(píng)分為0-3分，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分為1-4分，兩者相乘為染色指數(shù)，≤6分為FBXO38蛋白低表達(dá)，6分為高表達(dá)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的FBXO38蛋白在制備NSCLC預(yù)后評(píng)估試劑或者試劑盒中的應(yīng)用方法，其特征在于：所述步驟1)中梯度酒精溶液的配制：體積分?jǐn)?shù)70％、80％、85％、90％、95％的酒精均應(yīng)用無(wú)水乙醇和蒸餾水進(jìn)行稀釋配制；

PBS緩沖溶液的配制：氯化鈉12g，無(wú)水磷酸二氫鈉1.725g，無(wú)水磷酸氫二鉀0.3g，氯化鉀0.3g，應(yīng)用蒸餾水配制成1200ml，調(diào)整pH值為7.2；

檸檬酸緩沖液/抗原修復(fù)液的配制(0.01M)：檸檬酸A液：2.1g檸檬酸充分溶解于100ml蒸熘水中；檸檬酸三鈉B液：2.9g檸檬酸三鈉溶解于100ml蒸熘水中；依次抽取檸檬酸A液9ml和檸檬酸三鈉B溶液41ml加入450ml蒸餾水中混勻，總量為500ml，即配成pH值為6.0的檸檬酸緩沖液，留存?zhèn)溆谩?/p>