[發明專利]一種銅摻雜的Tb基MOF檢測CYFRA 21-1的電化學發光免疫傳感器的制備方法

在審

• 申請號: 202010638197.7
• 申請日: 2020-07-06
• 公開（公告）號: CN111830102A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 鞠熀先;周麗敏;魏琴;任祥;王超;范大偉;吳丹;馬洪敏
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/48;G01N21/76
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 趙鳳

1.一種銅摻雜的Tb基MOF檢測CYFRA 21-1的電化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，電化學發光免疫傳感器的制備包括以下步驟：

（1）將直徑為4 mm的玻碳電極用氧化鋁粉打磨拋光至鏡面，再用超純水洗滌干凈；

（2）將6 μL、濃度為2～12 mg/mL的銅摻雜的Tb基MOF的水溶液滴涂到電極表面，室溫保存至干燥；

（3）滴涂6 μL、濃度為1～12 μg/mL的CYFRA 21-1的抗體溶液于玻碳電極表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超純水清洗；

（4）滴涂3 μL、質量分數為1%的牛血清白蛋白，封閉非特異性活性位點，于4 ℃冰箱中保存至干燥，超純水清洗；

（5）將6 μL、濃度為0.0001～100 ng/mL的一系列不同濃度的CYFRA 21-1滴涂在電極表面，4 ℃冰箱中保存至干燥，超純水清洗，即制得檢測CYFRA 21-1的電化學發光免疫傳感器。

2.如權利要求1所述的一種銅摻雜的Tb基MOF檢測CYFRA 21-1的電化學發光免疫傳感器的制備方法，所述銅摻雜的Tb基MOF，其特征在于，制備步驟如下：

將2 mL、濃度為20 mM的TbCl₃水溶液和2 mL、濃度為20 mM的Cu(NO₃)₂溶液加入到5 mL的N，N-二甲基甲酰胺中，在攪拌的條件下加入2 mL、濃度為40 mM的鄰苯二甲酸，磁力攪拌20分鐘后，將上述溶液轉移至高壓反應釜中，160 ℃反應3小時，冷卻至室溫后，離心、洗滌、干燥得到銅摻雜的Tb基MOF；

為增強銅摻雜的Tb基MOF的導電性與生物相容性，稱取4.3 mg的普朗尼克 F127和0.35mg的十六烷基氯化吡啶一水合物溶解于2.5 mL蒸餾水中，在慢速攪拌下依次加入30 μL 、濃度為10 mM的HAuCl₄溶液，120 μL 、濃度為10 mM的Na₂PdCl₄溶液和120 μL 、濃度為10 mM的K₂PtCl₄溶液，再加入500 μL、濃度為2.5 mg/mL的銅摻雜的Tb基MOF溶液，超聲處理30分鐘后緩慢加入450 μL、濃度為30.4 mM的L-抗壞血酸，在室溫下劇烈攪拌1小時后，離心、洗滌、干燥得到銅摻雜的Tb基MOF與AuPdPt納米花的復合物。

3.如權利要求1所述的一種銅摻雜的Tb基MOF檢測CYFRA 21-1的電化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，用于CYFRA 21-1的檢測的，步驟如下：

（1）將Ag/AgCl電極作為參比電極、鉑電極作為對電極、所制得的電化學發光傳感器作為工作電極，連接在化學發光檢測儀的暗盒中，將電化學工作站和化學發光檢測儀連接在一起；

（2）化學發光檢測儀參數設置為，光電倍增管的高壓設置為750 V，掃描速率設置為0.1V/s；

（3）電化學工作站參數設置為，循環伏安掃描電位范圍為-1.8～0 V，掃描速率設置為0.1 V/s；

（4）使用含100 mM KCl和40～140 mM K₂S₂O₈的PBS緩沖溶液，通過電化學發光法檢測不同濃度的CYFRA 21-1產生的電化學發光信號強度；所述PBS緩沖溶液，其pH=5.0～8.5，用0.1 M Na₂HPO₄和0.1 M KH₂PO₄配制；

（5）根據所得的電化學發光強度值與CYFRA 21-1濃度對數的線性關系，繪制工作曲線。