[發(fā)明專利]用于檢測IgG4的組合物、試劑盒、應(yīng)用及檢測方法

有效

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• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111707835B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢鵬;曾敏霞;鄧京
• 申請（專利權(quán)）人: 珠海麗珠試劑股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 北京超成律師事務(wù)所 11646
• 代理人: 高玉光

本發(fā)明提供了一種用于檢測樣本中IgG4的組合物、試劑盒、應(yīng)用及檢測方法，涉及體外檢測的技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供的用于檢測IgG4抗原的組合物包括被IgG4抗體包被的納米磁微粒、偶聯(lián)有酶的IgG4抗體、樣品稀釋液a、樣品稀釋液b及酶促發(fā)光底物，該組合物通過納米磁微粒化學(xué)發(fā)光法能夠有效實現(xiàn)對IgG4抗原的檢測，降低了雙抗體與抗原結(jié)合的空間位阻，能夠以雙抗體夾抗原夾心法實現(xiàn)對IgG4抗原的檢測，有效提高了檢測的特異性、靈敏度、精密度及試劑化學(xué)發(fā)光的線性寬發(fā)光范圍。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種用于檢測IgG4的組合物、試劑盒、應(yīng)用及檢測方法。

背景技術(shù)

正常人體內(nèi)的免疫球蛋白G(IgG)包括四個亞型，分別為IgG1、IgG2、IgG3以及IgG4，其占比分別約為：60～70％、15～20％、5～10％及1～7％，IgG4相關(guān)性疾病是一種與IgG4淋巴細胞密切相關(guān)的慢性、系統(tǒng)性疾病。IgG4為人體內(nèi)含量最低的免疫球蛋白G亞型，故檢測試劑需要靈敏度較高，并且需要避免與其他類型的免疫球蛋白及IgG1-3發(fā)生交叉反應(yīng)，故又需特異性良好。

目前人免疫球蛋白G4的檢測方法主要有膠乳增強比濁和酶聯(lián)免疫兩種方法學(xué)，膠乳增強比濁的檢測原理為在高分子微球表面交聯(lián)能特異性結(jié)合IgG4蛋白的抗體，當攜帶有抗體的微球與IgG4蛋白結(jié)合后，微球發(fā)生聚集，改變了溶液的散光或透光性能，通過檢測溶液的發(fā)光值反應(yīng)檢測樣本的IgG4蛋白濃度。酶聯(lián)免疫法的檢測原理為在固相酶標板上包被能與IgG4蛋白特異結(jié)合的抗體用于捕獲樣本中的IgG4蛋白，當IgG4蛋白被固相載體上的抗體捕獲后結(jié)合有酶的二抗能與捕獲的IgG4蛋白再次結(jié)合，加入底物后二抗上的酶能使底物發(fā)生顏色變化，通過檢測底物的顏色變化來反應(yīng)樣本的IgG4蛋白濃度。這兩種方法學(xué)都存在特異性差，靈敏度低，線性范圍窄的缺點。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的在于提供一種用于檢測IgG4的組合物，以至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的人免疫球蛋白G4的檢測方法特異性差，靈敏度低，線性范圍窄問題之一。

本發(fā)明的第二個目的在于提供包含上述用于檢測IgG4的組合物的試劑盒。

本發(fā)明的第三個目的在于提供上述組合物或試劑盒在檢測IgG4中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個目的在于提供一種非診斷目的用于檢測IgG4的檢測方法。

本發(fā)明提供了一種用于檢測IgG4的組合物，所述組合物包括納米磁微粒溶液、酶結(jié)合液、樣本稀釋液a、樣本稀釋液b和發(fā)光底物；

所述納米磁微粒溶液包括第一抗體包被的納米磁微粒，所述第一抗體為對所述樣本中IgG4具有特異性的IgG4抗體；

所述酶結(jié)合液包括偶聯(lián)有酶的第二抗體，所述第二抗體為對所述樣本中IgG4具有特異性的抗體；

所述樣本稀釋液a包括用于將所述樣本中IgG4水解以產(chǎn)生與所述第一抗體和所述第二抗體特異性結(jié)合的Fc片段的蛋白水解酶；

所述樣本稀釋液b包括用于將所述蛋白水解酶濃度稀釋至不影響所述Fc片段與所述第一抗體和所述第二抗體結(jié)合的緩沖液；

所述發(fā)光底物包括酶促發(fā)光底物。

進一步的，所述樣本稀釋液b完全稀釋所述樣本稀釋液a后的蛋白水解酶濃度為M，所述樣本稀釋液a中蛋白水解酶稀釋前的濃度為N，其中滿足：M≤0.5％N。

進一步的，所述蛋白水解酶包括木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶，優(yōu)選的，所述蛋白水解酶濃度為1-4U/mL。

進一步的，所述磁珠包括甲苯磺酰基磁珠、羧基磁珠、氨基磁珠、鏈霉親和素磁珠，優(yōu)選為甲苯磺酰基磁珠；