[發明專利]副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法

在審

• 申請號: 202010635660.2
• 申請日: 2020-07-04
• 公開（公告）號: CN111671889A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 肖敏;孫勇;劉建;盧昌;羅志文;任華;王闖
• 申請（專利權）人: 江西正邦養殖有限公司;江西正邦農業科學院
• 主分類號: A61K39/102
• 分類號: A61K39/102;A61K39/39;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/21
• 代理公司: 南昌華成聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 36126
• 代理人: 張建新

本發明提供了副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法，該方法包括菌種制備、發酵罐擴大培養、菌種收集、滅活、稀釋等步驟。通過該方法可以得到具有較強針對性的副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗；該副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗具有血清型豐富多樣的特點，臨床免疫抗體水平達到商品苗的應用效果，死亡率綜合評價比未免疫組降低2.78％。

技術領域

本發明涉及獸用疫苗制備技術，具體涉及副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法。

背景技術

副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPs)為巴氏桿菌科嗜血桿菌屬中的一種革蘭氏陰性球桿菌，是豬的一種條件性病原菌，呈世界性分布，感染仔豬后引起以多發性漿膜炎、關節炎和腦膜炎為特征的豬格拉澤氏(Glasser’s)病。副豬嗜血桿菌主要危害2～8周齡的仔豬，發病率一般為10％～15％，死亡率可達50％以上。副豬嗜血桿菌有15個血清型，不同血清型的致病力也不相同，其中1型、2型、3型、4型、5型、8型、10型、12型、13型、14型和15型的致病力較強，而6型、7型、9型和11型沒有致病力。副豬嗜血桿菌的流行病學調查顯示，我國豬群中主要的流行血清型為2型、4型、5型、7型、12型和13型。目前，商品化副豬嗜血桿菌疫苗以滅活疫苗為主，血清型包括1型、4型、5型、12型和13型，然而還沒有2型和7型商品化疫苗。

發明內容

為了預防副豬嗜血桿菌2型感染豬只，本發明提供一種副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法。

本發明提供的一種副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

向無菌容器中加入第一培養基、體積分數(V/V)為1‰～5‰的NAD溶液、體積分數為5％～10％的血清，挑取副豬嗜血桿菌菌落于其中，在36℃～37℃下培養12～16h，得到菌種液；

向發酵罐中加入所述第一培養基、所述菌種液、體積分數為1‰～5‰的NAD溶液和體積分數為5％～10％的血清，在36℃～37℃下培養10h～12h，得到菌液；

將所述菌液離心，去除上清培養液后，得到菌種懸濁液；

向所述菌種懸濁液中加入體積分數為1‰～3‰的甲醛溶液，在36℃～37℃下滅活48～72h；

將滅活后的所述菌種懸濁液與疫苗佐劑、pH為7.0～7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)混合，得到副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗。

進一步地，所述無菌容器為無菌搖瓶。

進一步地，所述第一培養基為胰蛋白胨大豆肉湯培養基(TSB)，所述血清為小牛血清。

進一步地，所述離心的轉速為5000r/min～6000r/min，時間為5min～10min，離心后去除85％～90％的上清培養液，用移液管將沉淀與底部的菌體吹散，混勻。

進一步地，所述疫苗佐劑為畜禽用水包油包水佐劑(Summit-S550)。

進一步地，所述疫苗佐劑配比為30％～40％(V/V)，磷酸鹽緩沖液稀釋后抗原配比為60％～70％(V/V)，抗原終濃度為3×10⁹CFU/ml。

本發明的有益效果：提供了副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法，通過該方法可以得到具有較強針對性的副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗；該副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗具有血清型豐富多樣的特點，臨床免疫抗體水平達到商品苗的應用效果，死亡率綜合評價比未免疫組降低2.78％。

附圖說明

圖1顯示了HPs在金黃色葡萄球菌周圍的“衛星”生長現象，其中A無“衛星”生長現象，B有“衛星”生長現象。

圖2顯示了本發明實施例中HPs生化鑒定試驗結果，其中A革蘭氏染色試驗結果(陰性)，B過氧化氫試驗結果(產氣)，C糖類試驗結果。