[發(fā)明專利]副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010635660.2
• 申請日: 2020-07-04
• 公開（公告）號: CN111671889A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖敏;孫勇;劉建;盧昌;羅志文;任華;王闖
• 申請（專利權(quán)）人: 江西正邦養(yǎng)殖有限公司;江西正邦農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A61K39/102
• 分類號: A61K39/102;A61K39/39;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/21
• 代理公司: 南昌華成聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36126
• 代理人: 張建新

1.一種副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

向無菌容器中加入第一培養(yǎng)基、體積分?jǐn)?shù)(V/V)為1‰～5‰的NAD溶液、體積分?jǐn)?shù)為5％～10％的血清，挑取副豬嗜血桿菌菌落于其中，在36℃～37℃下培養(yǎng)12～16h，得到菌種液；

向發(fā)酵罐中加入所述第一培養(yǎng)基、所述菌種液、體積分?jǐn)?shù)為1‰～5‰的NAD溶液和體積分?jǐn)?shù)為5％～10％的血清，在36℃～37℃下培養(yǎng)10h～12h，得到菌液；

將所述菌液離心，去除上清培養(yǎng)液后，得到菌種懸濁液；

向所述菌種懸濁液中加入體積分?jǐn)?shù)為1‰～3‰的甲醛溶液，在36℃～37℃下滅活48～72h；

將滅活后的所述菌種懸濁液與疫苗佐劑、pH為7.0～7.4的磷酸鹽緩沖液混合，得到副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述無菌容器為無菌搖瓶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述第一培養(yǎng)基為胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基，所述血清為小牛血清。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述離心的轉(zhuǎn)速為5000r/min～6000r/min，時間為5min～10min，離心后去除85％～90％的上清培養(yǎng)液，用移液管將沉淀與底部的菌體吹散，混勻。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述疫苗佐劑為畜禽用水包油包水佐劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述疫苗佐劑配比為30％～40％(V/V)，磷酸鹽緩沖液稀釋后抗原配比為60％～70％(V/V)，抗原終濃度為3×10⁹CFU/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一權(quán)利要求所述的方法得到的副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的副豬嗜血桿菌2型滅活疫苗在制備預(yù)防副豬嗜血桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。