[發(fā)明專利]一種用于宮頸高級別病變及宮頸癌檢測的組合物及診斷試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010635634.X
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN112646882B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 施晨陽;阿蒂拉·洛林茨;石立立;祝旭景;陳華;韓亮
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州凱愛健康科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京艾普利德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32297
• 代理人: 張鉑

1.一種用于宮頸高級別病變及宮頸癌檢測的組合物，其特征在于由檢測人EPB41L3基因425、427、438位點(diǎn)甲基化，病毒HPV16L1基因6367、6389位點(diǎn)甲基化和HPV18L2基因4256、4261、4265、4269、4275和4282位點(diǎn)甲基化的特異性引物、各自的內(nèi)參基因引物以及EPB41L3基因、HPV 16L1基因和HPV18L2基因及各自的內(nèi)參基因的標(biāo)記有熒光基團(tuán)的探針組成，所述EPB41L3內(nèi)參基因選自ACTB，所述HPV16的內(nèi)參基因序列如SEQ ID No：19所示，所述HPV18的內(nèi)參基因序列如SEQ ID No：20所示，所述特異性引物、內(nèi)參基因引物以及探針的核苷酸序列如下所示：

EPB41L3正向引物如SEQ ID No：1所示，

EPB41L3反向引物如SEQ ID No：2所示，

EPB41L3熒光探針如SEQ ID No：3所示，

內(nèi)參ACTB正向引物如SEQ ID No：4所示，

內(nèi)參ACTB反向引物如SEQ ID No：5所示，

內(nèi)參ACTB探針如SEQ ID No：6所示，

HPV16 L1正向引物如SEQ ID No：7所示，

HPV16 L1反向引物如SEQ ID No：8所示，

HPV16 L1探針如SEQ ID No：9所示，

HPV16 L1內(nèi)參正向引物如SEQ ID No：10所示，

HPV16 L1內(nèi)參反向引物如SEQ ID No：11所示，

HPV16 L1內(nèi)參熒光探針如SEQ ID No：12所示，

HPV18L2正向引物如SEQ ID No：13所示，

HPV18L2反向引物如SEQ ID No：14所示，

HPV18L2探針如SEQ ID No：15所示，

HPV18L2內(nèi)參正向引物如SEQ ID No：16所示，

HPV18L2內(nèi)參反向引物如SEQ ID No：17所示，

HPV18L2內(nèi)參探針如SEQ ID No：18所示。

2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述EPB41L3基因、HPV16L1基因和HPV18L2基因及各自的內(nèi)參基因探針的5’端發(fā)光基團(tuán)相同或不同，選自FAM、HEX、ROX、JOE、VIC、TET、NED、FITC、CY3或CY5；3’端淬滅基團(tuán)相同或不同選自BHQ1、BHQ2、BHQ3、TAMRA、Eclipse、DABCYL。

3.權(quán)利要求1或2所述的組合物在制備宮頸高級別病變及宮頸癌診斷試劑中的應(yīng)用。

4.一種用于宮頸高級別病變及宮頸癌檢測的診斷試劑或試劑盒，其特征在于包括權(quán)利要求1或2所述的組合物。

5.如權(quán)利要求4所述的診斷試劑或試劑盒，其特征在于還包括甲基化特異性熒光定量PCR反應(yīng)液和熱啟動酶。

6.如權(quán)利要求5所述的診斷試劑或試劑盒，其特征在于所述甲基化特異性熒光定量PCR反應(yīng)液包括PCR反應(yīng)液1和 PCR反應(yīng)液2，PCR反應(yīng)液1用于擴(kuò)增甲基化的EPB41L3，PCR反應(yīng)液2用于擴(kuò)增甲基化的HPV16L1和HPV18L2，所述的 PCR 反應(yīng)液 1 包括： EPB41L3 甲基化正向引物、EPB41L3 甲基化反向引物、EPB41L3 甲基化探針、內(nèi)參A CTB 正向引物、內(nèi)參 ACTB反向引物、內(nèi)參 ACTB 探針、Tris、(NH4)₂SO₄、KCl、dNTP；所述的 PCR 反應(yīng)液 2 包括：HPV16L1 甲基化正向引物、HPV16L1 甲基化反向引物、HPV16L1 甲基化探針、HPV16L1內(nèi)參正向引物、HPV16 L1內(nèi)參反向引物、HPV16 L1內(nèi)參探針、HPV18L2甲基化正向引物、HPV18L2甲基化反向引物、HPV18L2 甲基化探針、HPV18L2內(nèi)參正向引物、HPV18L2內(nèi)參反向引物、HPV18L2內(nèi)參探針、Tris、(NH4)₂SO₄、KCl、dNTP。