[發明專利]一種用于宮頸高級別病變及宮頸癌檢測的組合物及診斷試劑

有效

• 申請號: 202010635634.X
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN112646882B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 施晨陽;阿蒂拉·洛林茨;石立立;祝旭景;陳華;韓亮
• 申請（專利權）人: 蘇州凱愛健康科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京艾普利德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32297
• 代理人: 張鉑

本發明公開了一種用于宮頸高級別病變及宮頸癌檢測的組合物及診斷試劑，所述組合物包括檢測人EPB41L3基因425、427、438位點甲基化，病毒HPV 16L1基因6367、6389位點甲基化和HPV18L2基因4256、4261、4265、4269、4275和4282位點甲基化的特異性引物及各自的內參基因引物。本發明通過聯合人EPB41L3和病毒HPV 16L1和HPV18L2甲基化檢測，首次將作為宮頸癌直接致病原因的高危HPV病毒甲基化水平納入檢測體系中，靈敏度高，特異性強，顯著提高了對宮頸高級別病變及宮頸癌的預測準確性。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種用于宮頸高級別病變檢測的組合物及診斷試劑或試劑盒，具體的，涉及EPB41L3、HPV16L1及HPV18L2甲基化的特異性引物及各自的內參基因引物。

背景技術

宮頸癌的發病率與死亡率居女性惡性腫瘤的第二位。WHO 2018年統計數據全球子宮頸癌新發病例58.98萬，在我國，每年約有13～15萬例新發病例，約占世界的30％。2018年全年我國宮頸癌死亡人數大約為4.7～4.8萬人，發病率和死亡率成逐年上升趨勢。宮頸癌雖是惡性腫瘤，但正常的宮頸細胞經過癌前病變發展到浸潤癌，可能有5～10年的潛伏期。整個過程中部分HPV病毒的感染可被自身免疫系統修復而自動轉歸為正常，而另一部分與宮頸癌聯系更加緊密的癌前病變則最終發展為宮頸癌。因此，選擇合適有效的診斷方法對于宮頸癌的防治具有重要意義。

宮頸癌的發生發展是由宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelialneoplasia,CIN)逐漸發展的連續、可逆轉的病理過程，該過程的任一階段早期發現及時診治都可以阻斷其向浸潤性癌發展。因此早期檢出高級別CIN并行阻斷性治療能夠有效控制宮頸癌的發生。根據CIN病變的嚴重程度可分為3級。CIN1是宮頸低級別病變,異型細胞局限于上皮下1/3的輕度細胞不典型增生。CIN2和CIN3合稱為宮頸高級別病變，其中，CIN2指的是病變范圍為上皮下2/3的中度細胞不典型增生，臨床上界定較為困難。CIN3則是超過上皮下2/3,甚至是累及全層的重度細胞不典型增生。高危型HPV感染后3-5年即可進展為高級別病變。但是由高級別病變進展成宮頸癌可能需20-30年。

目前應用最廣泛的宮頸癌篩查方法為宮頸液基細胞學檢查和高危型HPV檢測。液基細胞學檢查敏感性較低。有研究數據顯示，細胞學檢查在初篩過程中遺漏了約有一半的CIN2、CIN3及宮頸癌(CIN2+)患者，常造成對患者的漏診漏治。雖然高危型HPV DNA檢測靈敏度高，操作便于規范化。但HPV感染并不一定發展成為宮頸癌，事實上80％的女性一生中都會感染HPV病毒，但大部分均可以自我清除。因此高危型HPV檢查雖然具有很高的靈敏度和篩查特異性，但不具備很好的宮頸癌預測性。HPV陽性的結果會帶來較大的心理負擔，形成令人關注的社會問題。

目前的細胞和高危型HPV DNA聯合篩查仍然是停留在在健康人群中“初篩”出有“潛在”病變需要進一步觀察的人群。雖然陰道鏡引導下的活組織檢查女性宮頸癌和癌前病變診斷的“金標準，”但大部分HPV為一過性感染，細胞學存在漏檢，很多低級別病變會轉歸。目前通過檢測HPV病毒或細胞學的初篩結果，就需要通過有創檢查(陰道鏡)和處理(錐切等)的子宮頸上皮內瘤變病理來判斷受檢者患癌風險，這種過度治療過度檢查，一方面不利于婦女的健康狀態和生活質量，也會會導致醫療資源的大量浪費。

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要研究內容，基因甲基化是腫瘤發生過程中的早期事件，是細胞的遺傳本質和外界環境共同影響作用的結果。利用基因的甲基化來早期診斷腫瘤已經成了分子檢驗的一個熱點領域。國內外近年來越來越多的研究證明，隨著宮頸癌病變進展，宿主相關基因的DNA甲基化水平升高，所以找到合適的甲基化標志物，確定合理的風險分級和癌癥檢測的標準，將有望成為下一代宮頸癌篩查技術。例如，CN 110564857A公開了一種用于早期宮頸癌檢測的組合物及試劑盒，該組合物包括EPB41L3基因中3個發生高度甲基化的CpG島區域和JAM3基因中3個發生高度甲基化的CpG島區域的擴增引物，然而該組合物并不能很好地篩查宮頸上皮內瘤變的不同階段。