[發(fā)明專利]一種提高核酸得率并兼容后續(xù)反應(yīng)的方法和體系

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010634559.5
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號(hào): CN111676217B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊國華;郭志偉;李英輝;胡榮君
• 申請（專利權(quán)）人: 南京君華基因科技有限公司;上海羿鳴生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 上海德禾翰通律師事務(wù)所 31319
• 代理人: 侯莉

1.一種提高核酸得率并兼容后續(xù)反應(yīng)的方法，其包括以下步驟：

步驟1)使用附著有標(biāo)記分子結(jié)合位點(diǎn)的配體分子的固相載體吸附結(jié)合有所述標(biāo)記分子的核酸形成混合溶液；所述配體分子是親和素或鏈霉親和素；所述標(biāo)記分子是生物素；

步驟2)使用含有兩親性聚合物的洗脫溶液洗脫所述固相載體得到純化產(chǎn)物；所述含有兩親性聚合物的洗脫溶液為分子量為6000-8000的10％-30％PEG水溶液；所述洗脫的溫度為70-100℃。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述結(jié)合位點(diǎn)是兩個(gè)以上。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相載體是磁性微球；

和/或，所述洗脫溶液不含離子。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述核酸是片段化的雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA；

和/或，所述核酸的長度在25～200bp。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述步驟2)還包括對加入所述洗脫溶液的固相載體進(jìn)行振蕩重懸；

和/或，所述振蕩重懸在常溫下進(jìn)行。

6.一種提高核酸得率并兼容后續(xù)反應(yīng)的純化體系，其特征在于，

包括適用于如權(quán)利要求1-5中任一權(quán)利要求所述的提高核酸得率并兼容后續(xù)反應(yīng)的方法的固相載體和洗脫溶液。

7.一種核酸純化及連接體系，其包括權(quán)利要求6所述的純化體系，其特征在于，

所述連接體系還包括連接酶，所述連接酶用于核酸純化產(chǎn)物的后續(xù)連接反應(yīng)；

和/或，所述連接體系也不含離子；

所述連接體系也包含所述純化體系的洗脫溶液中包含的兩親性聚合物。

8.如權(quán)利要求7所述的核酸純化及連接體系，其特征在于，

還包括接頭寡核苷酸；

和/或，所述接頭DNA還包含測序通用序列或PCR引物序列；

和/或，所述接頭DNA的5′末端核苷酸被修飾。