[發明專利]一種咔唑類熒光衍生試劑的設計合成及其在氟蟲腈和氟蟲腈代謝物檢測中的應用

有效

• 申請號: 202010633521.6
• 申請日: 2020-07-02
• 公開（公告）號: CN111574502B
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 尹忠平;彭大勇;劉佳;上官新晨;李冬文;陳繼光;蔣艷;張清峰
• 申請（專利權）人: 江西農業大學
• 主分類號: C07D403/04
• 分類號: C07D403/04;C09K11/06;G01N30/06;G01N21/64
• 代理公司: 南昌金軒知識產權代理有限公司 36129
• 代理人: 牛永山

本發明涉及食品和農業安全檢測領域，具體涉及一種結構新穎的咔唑類熒光衍生試劑的設計合成及其在氟蟲腈和氟蟲腈代謝物檢測中的應用。經試驗證明，本發明所設計合成的咔唑類熒光衍生試劑，具有很強的熒光強度，基于該衍生試劑所建立的柱前衍生化測定氟蟲腈及其代謝物氟蟲腈亞砜的HPLC?FLD(高效液相色譜?熒光檢測)方法靈敏度高、檢測限和定量限低、穩定性和重現性好，將該方法應用于雞蛋中殘留氟蟲腈及其代謝物氟蟲腈亞砜檢測，結果準確、可靠，優于目前報道的HPLC?MS/MS、GC?MS方法。本發明所設計合成的咔唑類熒光衍生試劑性能優良，基于其所建立的氟蟲腈及其代謝物柱前衍生化檢測方法靈敏、可靠、準確，具有很好的應用前景。

技術領域

本發明涉及食品和農業安全檢測領域，具體涉及一種咔唑類熒光衍生試劑的設計合成及其在氟蟲腈和氟蟲腈代謝物檢測中的應用。

背景技術

2017年8月，歐洲市場驚現氟蟲腈含量超標的“毒雞蛋”，引起了人們對食品安全的高度關注。同年，在中國香港和中國 臺灣等多個地區也出現了這種“毒雞蛋”。隨著事件的發展，形勢愈發嚴峻，“毒雞蛋”事件波及全球，使人們陷入恐慌之中，該事件敲響預防和控制氟蟲腈殘留量超標的警鐘，氟蟲腈殘留檢測方法的相關研究也因此備受關注。

氟蟲腈(英文名：fipronil)，是法國普朗克公司于1987年研制的一種新型含氟、氯的苯基吡唑類殺蟲劑，我國于1994年將其應用于農業中防治害蟲。氟蟲腈導致昆蟲死亡的主要方式為觸殺、胃毒和一定的內吸作用，其作用機制為能與害蟲體內一種重要的抑制性神經遞質 -γ-氨基丁酸(GABA)受體結合，使其中樞神經系統中氯離子通道關閉，從而影響中樞神經系統正常發揮作用，神經和肌肉過度興奮，最終麻痹甚至死亡。但氟蟲腈半衰期較長，難降解，對環境不友好，可在動物和人體內富集而產生毒副作用，因此對氟蟲腈殘留進行檢測和控制是非常必要的。

目前，食品中氟蟲腈及其代謝物的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)、高效液相色譜-串聯質譜法(HPLC-MS/MS)、氣相色譜法 (GC)以及氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)，這些檢測方法各有優缺點，尚存在一定的不足，如檢測靈敏度高的方法會伴有樣品測前處理復雜、檢驗成本高、需要借助昂貴、精密的儀器、操作較為繁瑣等不足，而低成本、方便、快速的檢測方法則檢測的靈敏度又不太好。因此，開發穩定、靈敏、選擇性強、干擾小的氟蟲腈及其代謝物殘留的檢測方法是很有必要的。

研究表明，氟蟲腈結構中吡唑環上3位腈基、4位三氟甲基亞砜基及5位游離的氨基可被修飾和改造，可利用這一點來進行熒光衍生試劑的設計和合成。相比較而言，吡唑環上5位氨基更易修飾，因此針對該基團進行特異性反應生成較強熒光強度的氟蟲腈衍生物是可行的。

根據上述分析，本發明合成了熒光較強、結構新穎的咔唑類熒光衍生試劑，并基于該衍生試劑建立了的柱前衍生化檢測氟蟲腈及其代謝物的HPLC-FLD方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種結構新穎的咔唑類熒光衍生試劑 (4-(2-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)-1H-菲并[9,10-d]咪唑-1-基)丁酸，編號為L2)，并提供該熒光衍生試劑的制備方法，其是以9-乙基咔唑為主要原料，通過化學合成制備得到。本發明還提供了基于上述熒光衍生試劑(L2)所建立的柱前衍生化檢測氟蟲腈及其代謝物的HPLC-FLD 方法。由于本發明所設計合成的咔唑類熒光衍生試劑性能優良，基于其所建立的氟蟲腈及其代謝物柱前衍生化檢測方法靈敏、可靠、準確，因此具有很好的應用前景。

本發明的上述目的采用以下技術方案來實現：

本發明提供一種咔唑類熒光衍生試劑(L2)，包括4-(2-(9-乙基 -9H-咔唑-3-基)-1H-菲并[9,10-d]咪唑-1-基)丁酸，其結構式如下：

本發明還提供一種制備上述咔唑類熒光衍生試劑的方法，包括以下步驟：