[發(fā)明專利]一種hIL-12p40-MSCs的制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010632162.2
• 申請(qǐng)日: 2020-07-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111662930A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫艷;遲作華;余功旺;劉愛(ài)梅;陳立基;李金花
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867;C12N5/10;A61K35/28;A61P37/06;A61P7/06;A61P37/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 彭東梅

1.一種hIL-12p40-MSCs的制備方法，其特征在于，具體包括步驟：

(1)分離培養(yǎng)鑒定hMSCs；

(2)克隆擴(kuò)增hIL-12p40基因；

(3)構(gòu)建重組hIL-12p40慢病毒表達(dá)載體；

(4)慢病毒的包裝；

(5)hIL-12p40慢病毒感染MSCs；

(6)MSCs表達(dá)慢病毒介導(dǎo)的外源性hIL-12p40的鑒定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制備方法，其特征在于，所述的MSCs來(lái)源包括人臍帶、脂肪、骨髓、羊水、胎盤(pán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制備方法，其特征在于，所述的hIL-12p40基因具有SEQ NO 1(NM＿002187.2)所示的核苷酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述hIL-12p40-MSCs的制備方法，其特征在于，所述hIL-12基因的表達(dá)框架構(gòu)成為：從5’-3’方向依次為EF-1α啟動(dòng)子、hIL-12p40編碼基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制備方法，其特征在于，步驟(3)中采用慢病毒載體將hIL-12p40基因?qū)隡SCs，使hIL-12p40基因在MSCs穩(wěn)定表達(dá)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制備方法，其特征在于，步驟(5)中慢病毒感染6代以內(nèi)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期hMSCs。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述hIL-12p40-MSCs的制備方法，其特征在于，步驟(5)中慢病毒感染hMSCs的MOI值范圍為20-50。

8.根據(jù)權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的hIL-12p40-MSCs在制備抑制細(xì)胞免疫的藥物中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的hIL-12p40-MSCs在制備治療再生障礙性貧血、移植排斥反應(yīng)及自身免疫性疾病等細(xì)胞免疫增強(qiáng)型疾病的藥物中的應(yīng)用。