[發(fā)明專利]一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存保護(hù)液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010631921.3
• 申請(qǐng)日: 2020-07-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111602652A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高戎戎;佟艷輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海中溢精準(zhǔn)醫(yī)療科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 分類(lèi)號(hào): A01N1/02;C12N5/0775
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

1.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存保護(hù)液，其特征在于：該凍存保護(hù)液包括甘油、人血白蛋白、透明質(zhì)酸和MEM培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存保護(hù)液，其特征在于：所述凍存保護(hù)液包括7.5vol％～12.5vol％的甘油、5vol％～7.5vol％的透明質(zhì)酸、5vol％～7.5vol％的人血白蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存保護(hù)液，其特征在于：所述甘油的含量為6.5vol％～8.8vol％。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存保護(hù)液，其特征在于：所述透明質(zhì)酸為D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的雙糖單位玻尿酸。

5.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1臍帶預(yù)處理；

S2傳代培養(yǎng)：加入MEM培養(yǎng)基，進(jìn)行傳代培養(yǎng)；

S3收集細(xì)胞：吸除培養(yǎng)皿中的組織塊或培養(yǎng)基，進(jìn)行潤(rùn)洗，收集細(xì)胞懸液，用MEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度后接種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，最后收集細(xì)胞；

S4凍存細(xì)胞：使用權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存保護(hù)液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行凍存。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存方法，其特征在于：S1臍帶預(yù)處理的具體方法為：在生物安全柜中，將新鮮臍帶放置于培養(yǎng)皿中，進(jìn)行沖洗，后潤(rùn)洗，之后將洗凈的臍帶剪成小段，將臍帶小段外層的羊膜剝凈，撕開(kāi)華通氏膠，剔除動(dòng)脈和經(jīng)脈，將血跡清洗干凈，將洗凈的臍帶小段剪成組織塊，并將組織塊均勻散布在培養(yǎng)皿中。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存方法，其特征在于：S2傳代培養(yǎng)的具體方法為：在放置有臍帶組織塊的培養(yǎng)皿中加入含有血清的MEM培養(yǎng)基，之后放入溫度為37℃、CO₂體積分?jǐn)?shù)為5％的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，之后進(jìn)行加液，換液，培養(yǎng)到細(xì)胞達(dá)80％融合度，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存方法，其特征在于：S3收集細(xì)胞的具體方法為：吸除培養(yǎng)皿中的組織塊或培養(yǎng)基，進(jìn)行潤(rùn)洗，棄上清，加入TrypLE消化，再用與TrypLE等量的相對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基終止，收集細(xì)胞懸液，用濾網(wǎng)過(guò)濾至離心瓶中，離心去上清，加入生理鹽水，計(jì)數(shù)，再離心去上清，用MEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為1×10⁵cells/ml，按照4×10⁵cells/皿接種于細(xì)胞瓶中，于37℃、體積分?jǐn)?shù)5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞達(dá)80％融合度，進(jìn)行收集。