[發明專利]一種獼猴桃外植體脫毒方法

有效

• 申請號: 202010631526.5
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111713410B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 尚靜;張凱皓;賈琦;張敏
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京正華智誠專利代理事務所(普通合伙) 11870
• 代理人: 何凡

本發明提供了一種獼猴桃外植體脫毒方法，依次包括以下步驟：外植體選取：除去獼猴桃幼苗葉片，截取1～2cm帶芽莖段，清洗消毒，用無菌濾紙吸干，剝離外植體分生組織；誘導培養：將外植體分生組織接種到誘導培養基，先暗培養，再光暗培養，得叢生芽；生根培養：當叢生芽長至1～2.5cm，并伴有2～5片新葉時，轉接到生根培養基上，光暗培養，得組培苗；煉苗移栽：將組培苗培養，移栽到混合基質中，培養得脫毒苗。本發明依次通過外植體選取、誘導培養、生根培養和煉苗移栽，得到健壯的脫毒種苗，降低生產成本，提高苗木品質，有效解決了現有技術中獼猴桃種苗帶毒和帶毒率較高等問題，有利于獼猴桃種植產業的大面積推廣。

技術領域

本發明屬于組織培養技術領域，具體涉及一種獼猴桃外植體脫毒方法。

背景技術

獼猴桃，獼猴桃科獼猴桃屬植物，原產于我國的藤本果樹，是一種重要的經濟果樹。獼猴桃富含多種維生素，尤其是維生素C含量很高，還含有大量礦物質，精氨酸等，因此獼猴桃還被稱為水果之王。獼猴桃被廣泛應用于食品飲料加工，保健品等形式。獼猴桃一種作為多年生果樹，病毒病害是一項很嚴重的病害，目前沒有有效的治療措施與方法，對獼猴桃種植的推廣有很大的阻力。

獼猴桃用種子繁殖易造成品種退化，母本的一些優良性狀難以保持，而通過扦插或嫁接容易攜帶病毒病和潰瘍病等病原物。常規方法得到的種苗常常出現帶毒的情況，存活率較低，不能得到生產健壯的獼猴桃種苗，種植成本較高，苗木品質低。

發明內容

針對現有技術中存在的上述問題，本發明提供一種獼猴桃外植體脫毒方法，依次通過外植體選取、誘導培養、生根培養和煉苗移栽，得到健壯的脫毒種苗，降低生產成本，提高苗木品質，有效解決了現有技術中獼猴桃種苗帶毒和帶毒率較高等問題，有利于獼猴桃種植產業的大面積推廣。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：提供一種獼猴桃外植體脫毒方法，依次包括以下步驟：

(1)外植體選取：除去獼猴桃幼苗葉片，截取1～2cm帶芽莖段，清洗消毒，用無菌濾紙吸干，剝離2～2.5mm外植體分生組織；

(2)誘導培養：將步驟(1)所得外植體分生組織接種到誘導培養基，暗培養1～2d，再光暗培養25～35d，得叢生芽；

(3)生根培養：當步驟(2)所得叢生芽長至1～2.5cm，并伴有2～5片新葉時，轉接到生根培養基上，光暗培養30d，得組培苗；

(4)煉苗移栽：將步驟(3)所得組培苗在23～28℃和60～65％濕度條件下培養2～4d，除去組培苗上的培養基并移栽到混合基質中，培養得脫毒苗。

進一步，外植體為莖尖或腋芽。

進一步，步驟(1)中，清洗消毒時，先流水沖洗1～2h，然后用濃度為75vt％乙醇浸泡20～40s，無菌水沖洗2～4次，再用3～5wt％的次氯酸鈉溶液消毒2～4min，無菌水沖洗5～7次，最后用無菌濾紙吸干。

進一步，步驟(2)～(3)中光暗培養時，每日在2000Lx光照和23～26℃溫度下培養12h，在21～23℃溫度下黑暗培養12h。

進一步，誘導培養基在1L MS培養基的基礎上，加入了6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸(NAA)、蔗糖和瓊脂；其中，6-芐氨基腺嘌呤濃度為2mg/L，萘乙酸濃度為0.2mg/L，蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7g/L。

進一步，生根培養基在1L 1/2MS培養基的基礎上，加入了萘乙酸、蔗糖和瓊脂；其中萘乙酸濃度為0.2mg/L，蔗糖濃度為15g/L，瓊脂濃度為7g/L。

進一步，混合基質通過以下方法制備得到：將草炭土、蛭石和珍珠巖按體積比1～2:1:1混合，得混合基質。

進一步，步驟(4)中煉苗時，光照為20000～21000Lx。