[發明專利]一種獼猴桃外植體脫毒方法

有效

• 申請號: 202010631526.5
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111713410B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 尚靜;張凱皓;賈琦;張敏
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京正華智誠專利代理事務所(普通合伙) 11870
• 代理人: 何凡

1.一種獼猴桃外植體脫毒方法，其特征在于，依次包括以下步驟：

(1)外植體選取：除去獼猴桃幼苗葉片，截取1～2cm帶芽莖段，清洗消毒，用無菌濾紙吸干，剝離2～2.5mm外植體分生組織；所述外植體為莖尖或腋芽；

(2)誘導培養：將步驟(1)所得外植體分生組織接種到誘導培養基，暗培養1～2d，再光暗培養25～35d，得叢生芽；所述誘導培養基在1L MS培養基的基礎上，加入了6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸(NAA)、蔗糖和瓊脂；其中，6-芐氨基腺嘌呤濃度為2mg/L，萘乙酸濃度為0.2mg/L，蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為7g/L；

(3)生根培養：當步驟(2)所得叢生芽長至1～2.5cm，并伴有2～5片新葉時，轉接到生根培養基上，光暗培養30d，得組培苗；所述生根培養基在1L 1/2MS培養基的基礎上，加入了萘乙酸(NAA)、蔗糖和瓊脂；其中，萘乙酸濃度為0.2mg/L，蔗糖濃度為15g/L，瓊脂濃度為7g/L；

(4)煉苗移栽：將步驟(3)所得組培苗在23～28℃和60～65％濕度條件下培養2～4d，除去組培苗上的培養基并移栽到混合基質中，培養得脫毒苗。

2.如權利要求1所述的獼猴桃外植體脫毒方法，其特征在于，步驟(1)中，清洗消毒時，先流水沖洗1～2h，然后用濃度為75vt％乙醇浸泡20～40s，無菌水沖洗2～4次，再用3～5wt％的次氯酸鈉溶液消毒2～4min，無菌水沖洗5～7次，最后用無菌濾紙吸干。

3.如權利要求1所述的獼猴桃外植體脫毒方法，其特征在于，步驟(2)～(3)中光暗培養時，每日在2000Lx光照和23～26℃溫度下培養12h，在21～23℃溫度下黑暗培養12h。

4.如權利要求1所述的獼猴桃外植體脫毒方法，其特征在于，所述混合基質通過以下方法制備得到：將草炭土、蛭石和珍珠巖按體積比1～2:1:1混合，得混合基質。

5.如權利要求1所述的獼猴桃外植體脫毒方法，其特征在于，步驟(4)中煉苗時，光照為20000～21000Lx。