[發(fā)明專利]一種從酶反應(yīng)液中分離純化玻色因的方法

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• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111704595A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李赟高;蔡衡;其他發(fā)明人請求不公開姓名
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇瑞蓓麗生物科技有限公司
• 主分類號: C07D309/10
• 分類號: C07D309/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從酶反應(yīng)液中分離純化玻色因的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：在酶催化反應(yīng)結(jié)束后，往溶液中加入1％-10％異丙醇，并攪拌1-6h，使溶液中酶蛋白充分溶脹，玻色因充分溶出。。

(2)板框壓濾：將溶液導(dǎo)入板框壓濾機(jī)進(jìn)行壓濾。

(3)一次濃縮：濾液升溫至80-85℃進(jìn)行簡單蒸發(fā)，直至將異丙醇全部蒸發(fā)完畢。

(4)靜置：將溶液靜置并自然冷卻至40-60℃，并舍棄少量的上層膠體物質(zhì)。

(5)活性炭脫色：靜置后的下層溶液通入活性炭過濾器，溫度為40-60℃，攪拌速度為50-150rpm，并循環(huán)3-5次。

(6)二次濃縮：將脫色后溶液進(jìn)行真空脫水，溫度設(shè)置為40-80℃，真空度為1-10mmHg。此步驟脫去90％的水。

(7)離心萃?。簩饪s液加入萃取劑導(dǎo)入離心萃取機(jī)進(jìn)行離心萃取。離心轉(zhuǎn)速為20-100rpm。萃取溫度為20-40℃。

(8)蒸餾：將萃取液升溫至60-90℃，真空度為1-10mmHg，蒸去萃取劑后獲得玻色因純品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從酶反應(yīng)液中分離純化玻色因的方法，其特征在于：所述步驟(2)中的所選用的助濾劑是硅藻土AG-800#，也可是硅藻土AG-3000#。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從酶反應(yīng)液中分離純化玻色因的方法，其特征在于：所述步驟(5)中所選用的活性炭是粉末活性炭，優(yōu)選針劑型活性炭。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從酶反應(yīng)液中分離純化玻色因的方法，其特征在于：所述步驟(7)中的萃取劑選自乙酸乙酯、正己烷、乙酸丁酯、環(huán)己烷、甲苯、二甲苯中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從酶反應(yīng)液中分離純化玻色因的方法，其特征在于：所述步驟(7)中的萃取劑用量為溶液∶萃取劑＝1∶(0.5-2)(v/v)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從酶反應(yīng)液中分離純化玻色因的方法，其特征在于：所述步驟(7)中離心萃取循環(huán)次數(shù)為1-3次。