[發明專利]一種從酶反應液中分離純化玻色因的方法

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• 申請號: 202010629022.X
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111704595A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 李赟高;蔡衡;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 江蘇瑞蓓麗生物科技有限公司
• 主分類號: C07D309/10
• 分類號: C07D309/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種從酶反應液中分離純化玻色因的方法，本發明的操作步驟如下：樣品預處理——板框壓濾——一次濃縮——靜置——活性炭脫色——二次濃縮——離心萃取——蒸餾。該方法工藝簡單，能有效的除去酶反應過程中帶來的蛋白、生物膠體以及色素等雜質，成本低廉，產品純度高、產量高，適合工業化生產。

技術領域

本發明涉及酶工程技術領域，具體是一種從酶反應液中分離純化玻色因的方法。

背景技術

玻色因，是一種具有抗衰老活性物的木糖衍生物，其作用與木糖有著相似的地方。玻色因具有促進葡糖氨基葡聚糖即粘多糖(GAGs)生成的能力，可誘導淺表皮層中GAGs黏多糖和 PG蛋白多糖的生物合成，可以促進膠原蛋白的合成，有效促進表皮-真皮緊密連接，使肌膚更強韌有彈性，能夠改善臉部、頸部細紋，預防衰老。

目前，玻色因的生產方法主要是化學合成法，但由于利用生物酶催化制備更加安全高效，成本低廉且對環境更加友好，因此此方法越來越受到關注。盡管酶催化專一，產物相對較純，副產物幾乎沒有，但是在反應過程中不可避免的引入了酶蛋白，且會有一些生物膠體產生。目前所使用的方法已經無法得到高純度的玻色因。

因此，研究新型的可連續生產的、能耗小、成本低、產率較高、提取純度較高的玻色因純化方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從酶反應液中分離純化玻色因的方法，以解決現有技術中的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：該方法包括以下步驟：

(1)預處理：在酶催化反應結束后，往溶液中加入1％-10％異丙醇，并攪拌1-6h，使溶液中酶蛋白充分溶脹，玻色因充分溶出。

(2)板框壓濾：將溶液導入板框壓濾機進行壓濾。

(3)一次濃縮：濾液升溫至80-85℃進行簡單蒸發，直至將異丙醇全部蒸發完畢。

(4)靜置：將溶液靜置并自然冷卻至40-60℃，并舍棄少量的上層膠體物質。

(5)活性炭脫色：靜置后的下層溶液通入活性炭過濾器，溫度為40-60℃，攪拌速度為50-150rpm，并循環3-5次。

(6)二次濃縮：將脫色后溶液進行真空脫水，溫度設置為 40-80℃，真空度為1-10mmHg。此步驟脫去90％的水。

(7)離心萃取：將濃縮液加入萃取劑導入離心萃取機進行離心萃取。離心轉速為20-100rpm。萃取溫度為20-40℃。

(8)蒸餾：將萃取液升溫至60-90℃，真空度為1-10mmHg，蒸去萃取劑后獲得玻色因純品。

作為優化，步驟(2)中的所選用的助濾劑是硅藻土AG-800#，也可是硅藻土AG-3000#。

作為優化，步驟(2)中的所選用的助濾劑是硅藻土AG-800#。

作為優化，步驟(5)中所選用的活性炭是粉末針劑型活性炭。

作為優化，步驟(7)中的萃取劑選自乙酸乙酯、正己烷、乙酸丁酯、環己烷、甲苯、二甲苯中的一種。

作為優化，步驟(7)中的萃取劑為乙酸乙酯。

作為優化，步驟(7)中的萃取劑用量為溶液∶乙酸乙酯＝1 ∶(0.5-2)(v/v)。

作為優化，步驟(7)中離心萃取循環次數為1-3次。

本發明所使用的高效液相色譜儀為Waters高效液相色譜儀 2695，檢測條件為：氨基柱(MGII 5μm，4.6mm*250mm)，檢測器：示差檢測器，流速：1.0mL/min，柱溫：35℃，進樣量10 μL，流動相：純水∶乙腈＝25∶75(v/v)。