[發明專利]檢測HBB基因突變的引物、方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202010627835.5
• 申請日: 2020-07-02
• 公開（公告）號: CN111733232A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 柏忠良
• 申請（專利權）人: 南京艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

1.檢測HBB基因突變的引物，其特征在于，包括至少一對用于擴增HBB基因的擴增引物和一對測序引物M13F和M13R，所述擴增引物選自HBB-1_2F/HBB-1_2R、HBB-3_6F/HBB-3_6R、HBB-7_9F/HBB-7_9R、HBB-10F/HBB-10R，其堿基序列為：

HBB-1_2F：TGATGTGGAACCAGAAAGCTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-1_2R：GGGCAGCATAGCAAGAACAACAGCTATGACCATG；

HBB-3_6F：TCCCACCTCAGCCTCAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-3_6R：ACCCGCCTCATAGCAATGAACAGCTATGACCATG；

HBB-7_9F：ACAGCCAGTGATGCTACCGTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-7_9R：ACCAGCCTCCACCACATTTAACAGCTATGACCATG；

HBB-10F：ACAGTCATCATTCCGAACCTTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-10R：GAGCACAGTGGACCATCAGAACAGCTATGACCATG；

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；

M13R：AACAGCTATGACCATG。

2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，所述突變選自IVS2-13A/CG、R356W、I172N和E3Δ8bp突變。

3.一種檢測樣品中HBB基因突變的方法，其特征在于，其包括如下步驟：

(1)提取樣品DNA；

(2)利用至少一對擴增引物對(1)中的DNA進行擴增，獲得擴增產物，其中，所述擴增引物選自HBB-1_2F/HBB-1_2R，HBB-3_6F/HBB-3_6R，HBB-7_9F/HBB-7_9R，HBB-10F/HBB-10R；

(3)利用測序引物M13F與M13R對(2)中的擴增產物分別進行正向和反向測序，獲得所述擴增產物的基因序列；

(4)將(3)中的基因序列與野生型HBB基因序列進行比較，確定HBB基因是否發生突變；

所述擴增引物和測序引物的堿基序列為：

HBB-1_2F：TGATGTGGAACCAGAAAGCTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-1_2R：GGGCAGCATAGCAAGAACAACAGCTATGACCATG；

HBB-3_6F：TCCCACCTCAGCCTCAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-3_6R：ACCCGCCTCATAGCAATGAACAGCTATGACCATG；

HBB-7_9F：ACAGCCAGTGATGCTACCGTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-7_9R：ACCAGCCTCCACCACATTTAACAGCTATGACCATG；

HBB-10F：ACAGTCATCATTCCGAACCTTGTAAAACGACGGCCAGT

HBB-10R：GAGCACAGTGGACCATCAGAACAGCTATGACCATG；

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；

M13R：AACAGCTATGACCATG。