[發(fā)明專(zhuān)利]用于21-三體風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010627219.X
• 申請(qǐng)日: 2020-07-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111763725A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 殷建;尹煥才;田晶晶;藺春茂
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 濟(jì)南國(guó)科醫(yī)工科技發(fā)展有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 孔凡玲

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于21?三體風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒，包括內(nèi)切酶緩沖液體系和PCR反應(yīng)體系，所述PCR反應(yīng)體系包括針對(duì)8個(gè)檢測(cè)區(qū)域EP1?EP8的引物組。本發(fā)明的試劑盒通過(guò)優(yōu)選的限制性核酸內(nèi)切酶去除孕婦外周血中的未甲基化位點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)對(duì)胎兒DNA分離，通過(guò)對(duì)可提示胎兒三體風(fēng)險(xiǎn)的8個(gè)區(qū)域進(jìn)行檢測(cè)，之后結(jié)合成熟的熒光定量PCR，即可用于反映胎兒21?三體風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明的試劑盒通過(guò)篩選與三體風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)且水平較為穩(wěn)定的多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，并設(shè)置2個(gè)對(duì)照位點(diǎn)，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；本發(fā)明僅需檢測(cè)數(shù)個(gè)基因位點(diǎn)即可預(yù)測(cè)胎兒三體風(fēng)險(xiǎn)，可克服高通量基因測(cè)序造成的高成本及長(zhǎng)檢測(cè)周期的缺陷，從而成為潛在的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷的新產(chǎn)品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療檢測(cè)用試劑領(lǐng)域，特別涉及一種用于21-三體風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒。

背景技術(shù)

21-三體(T-21)綜合征，又稱(chēng)唐氏綜合征，先天愚型或Down綜合征，是臨床上最常見(jiàn)的染色體非整倍體疾病。其發(fā)病率分別約為1/700，患兒絕大多數(shù)存在嚴(yán)重智力障礙及器官畸形。迄今為止，針對(duì)該疾病還沒(méi)有有效的治療手段。因此，降低生育染色體疾病患兒風(fēng)險(xiǎn)的最好方法是盡早通過(guò)產(chǎn)前遺傳咨詢以及產(chǎn)前檢測(cè)、診斷、發(fā)現(xiàn)并解決問(wèn)題。因此，T21檢測(cè)一直是目前臨床診斷中控制和預(yù)防出生缺陷的重中之重。

當(dāng)前，胎兒染色體非整倍體的產(chǎn)前診斷主要通過(guò)基于血清學(xué)檢測(cè)的唐氏篩查進(jìn)行初篩，并對(duì)風(fēng)險(xiǎn)較高的孕婦采用羊水穿刺方法獲取細(xì)胞，進(jìn)而采用細(xì)胞生物學(xué)的方法進(jìn)行核型分析，這一流程被視為金標(biāo)準(zhǔn)，但因其有創(chuàng)性，對(duì)孕婦宮內(nèi)感染、早產(chǎn)及流產(chǎn)存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，限制其廣泛應(yīng)用于臨床。此外，細(xì)胞遺傳學(xué)診斷也存在費(fèi)時(shí)(一般要兩周以上)、容易培養(yǎng)失敗以及不能檢測(cè)較小的染色體結(jié)構(gòu)畸變等缺點(diǎn)。自2007年起，基于高通量測(cè)序的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷技術(shù)開(kāi)始在臨床上開(kāi)展應(yīng)用，目前已被廣泛用于高齡產(chǎn)婦的三體篩查及遺傳病檢測(cè)中。但該方法依賴于高通量測(cè)序及大量的統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，因此成本較高，且需要2周以上的檢測(cè)周期及1200元左右的檢測(cè)價(jià)格。

基于以上研究背景，建立安全、快速、準(zhǔn)確且無(wú)創(chuàng)的產(chǎn)前診斷方法仍是未來(lái)臨床技術(shù)發(fā)展的必須。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種用于21-三體風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種用于21-三體風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)的試劑盒，包括內(nèi)切酶緩沖液體系和PCR反應(yīng)體系，所述PCR反應(yīng)體系包括如下引物組：

針對(duì)檢測(cè)區(qū)域EP1的上游引物：5’-TCGTTATATGGATGCCTTG-3’，下游引物：5’-AACTGTTGGGCTGAACTGA-3’；

針對(duì)檢測(cè)區(qū)域EP2的上游引物：5’-TCATTTTCCTCTCGCTCTGC-3’，下游引物：5’-CACTCAGGGTCCTCAGTTCG-3’；

針對(duì)檢測(cè)區(qū)域EP3的上游引物：5’-GCGCCTAGCACAGACTCTTC-3’，下游引物：5’-TCAAATACCCGCACAGTTCA-3’；

針對(duì)檢測(cè)區(qū)域EP4的上游引物：5’-TTCTGTGCAACTTTCGCTTG-3’，下游引物：5’-CGTCTCTCACTCCCTGCACT-3’；

針對(duì)檢測(cè)區(qū)域EP5的上游引物：5’-CCGTGTGGCCAGAGGTG-3’，下游引物：5’-AAAGGGCCAGGTCGGGA-3’；

針對(duì)檢測(cè)區(qū)域EP6的上游引物：5’-GACCCAGACGATACCTGGAA-3’，下游引物：5’-GCTGAACAAAACTCGGCTTC-3’；

針對(duì)檢測(cè)區(qū)域EP7的上游引物：5’-TAGCTGGCACCCGCTGG-3’，下游引物：5’-GTGTGGGGTTGCACGCGC-3’；