[發明專利]一種利用CRISPR/dCas9調控細菌纖維素網狀結構的方法在審
| 申請號： | 202010626985.4 | 申請日： | 2020-07-02 |
| 公開（公告）號： | CN111718963A | 公開（公告）日： | 2020-09-29 |
| 發明（設計）人： | 鐘成;孫雪文;李雪晶 | 申請（專利權）人： | 天津科技大學 |
| 主分類號： | C12N15/90 | 分類號： | C12N15/90;C12N15/74;C12N1/21;C12P19/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 黃淑娟 |
| 地址： | 300457 天津市濱*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 crispr dcas9 調控 細菌 纖維素 網狀結構 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種利用CRISPR/dCas9調控細菌纖維素網狀結構的方法。其特征在于：利用sgRNA-dCas9復合體靶向結合galU基因的不同位點，獲得了不同表達水平的galU菌株，galU的表達量與BC的孔隙率負相關，與BC的結晶度正相關。
2.如權利要求1所述的方法,包括以下步驟：
(1)利用Golden Gate assembly的方法，將靶向galU不同位點的20nt序列插入到構建好的pdCas9載體，并導入E.coli DH5α中；
(2)將構建好的質粒導入G.xylinus CGMCC 2955中；
(3)利用RT-qPCR的方法測定工程菌株中galU的表達量；
(4)利用SEM和XRD表征細菌纖維素的孔隙率和結晶度。
3.如權利要求1所述的方法，所述設計了靶向位于galU起始密碼子第-34位、329位、615位、771位堿基的特異性20nt序列。
4.如權利要求1所述的方法，所述在以葡萄糖為碳源的HS培養基中培養菌株24h后，提取RNA，獲取cDNA，利用RT-qPCR的方法，以gryB為內參基因，測定菌株中galU基因的表達量。
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