[發明專利]一種申嗪霉素發酵工藝

有效

• 申請號: 202010626495.4
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111690700B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 張進武;郝祥蕊;馮鎮泰;張紅艷;龔新進
• 申請（專利權）人: 上海農樂生物制品股份有限公司
• 主分類號: C12P17/12
• 分類號: C12P17/12;C12N1/20;C12R1/39
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明涉及微生物發酵領域，特別是涉及一種申嗪霉素發酵工藝，所述發酵工藝包括：向M18菌體發酵體系中補加碳源和/或氮源。所述碳源選自糖類、油脂、有機酸、有機酸酯或小分子醇。所述氮源選自無機氮源或有機氮源。所述無機氮源選自銨鹽，所述銨鹽優選為硫酸銨或硝酸銨，所述有機氮源選自復合氨基酸粉或酰胺。本發明的申嗪霉素發酵工藝維持菌體的連續生長和產物形成的需要，延緩菌體的衰老，將申嗪霉素大罐發酵周期延長至65小時左右；延長發酵產物PCA的合成與分泌周期，在延長期發酵產物PCA的含量仍繼續大幅增長，最高含量可達9.7g/L以上；大大提高了發酵產量，降低了生產成本。

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，特別是涉及一種申嗪霉素發酵工藝。

背景技術

申嗪霉素是一種吩嗪類農用廣譜殺菌劑，化學名稱為吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid，簡稱PCA)，是利用促生拮抗菌M18于發酵罐中深層培養再經提取純化而得。該菌類屬熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)，已保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號：CGMCC NO.0462，在中國專利CN00119857.2中，發明人許煜泉、馮鎮泰描述了生物農藥促生拮抗菌M18及其制備方法，該專利被參考并結合于本文中。

目前利用M18菌工業化生產PCA的整個發酵過程中，發酵前25小時左右為菌體生長繁殖階段，大約75％的營養成分C(還原糖)、N(氨基氮)被消耗，隨后進入產物PCA的生物合成階段，發酵約40小時之后，營養成分C基本消耗完畢，菌體生長受到影響，開始衰老自溶，釋放出胞內氨基氮和產物分解酶導致產物PCA的含量開始下降，發酵結束，發酵液中產物PCA含量為4.5g/L左右。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種申嗪霉素發酵工藝，用于解決現有技術中的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種申嗪霉素發酵工藝，所述發酵工藝包括：向M18菌體發酵體系中補加碳源和/或氮源。

優選的，所述M18發酵體系選自以下方式獲得：

1)將M18菌體種子菌液接種至發酵搖瓶中獲得；

2)將M18菌體種子菌液接入種子罐中培養，待菌體濃度OD600達2.0以上時移種至大罐中發酵獲得。

優選的，所述碳源選自糖類、油脂、有機酸或有機酸酯。

優選的，糖類選自單糖或多糖，所述單糖優選為葡萄糖，所述多糖優選為蔗糖。

優選的，所述氮源選自無機氮源或有機氮源。

優選的，所述無機氮源選自銨鹽，所述銨鹽優選為硫酸銨或硝酸銨，所述有機氮源選自復合氨基酸粉或酰胺。

優選的，補加的碳源或氮源為各自的水溶液。

優選的，當發酵體系內還原糖的含量或氨基氮的含量為起始質量濃度的70％～75％時，補加入碳源或氮源。

優選的，以發酵容器的培養基裝量體積為基數計量，補加的碳源總量為0.2％～1.0％，和/或，補加的氮源總量為0.2％～0.8％。

優選的，補加碳源/或氮源的方式選自分次補加或持續補加。

如上所述，本發明的申嗪霉素發酵工藝，具有以下有益效果：

1)維持菌體的連續生長和產物形成的需要，延緩菌體的衰老，將申嗪霉素大罐發酵周期延長至65小時左右；

2)延長發酵產物PCA的合成與分泌周期，在延長期發酵產物PCA的含量仍繼續大幅增長，最高含量可達9.7g/L以上；

3)大大提高了發酵產量，降低了生產成本。

附圖說明