[發(fā)明專利]一種申嗪霉素發(fā)酵工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010626495.4
• 申請(qǐng)日: 2020-07-01
• 公開（公告）號(hào): CN111690700B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張進(jìn)武;郝祥蕊;馮鎮(zhèn)泰;張紅艷;龔新進(jìn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海農(nóng)樂生物制品股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P17/12
• 分類號(hào): C12P17/12;C12N1/20;C12R1/39
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，特別是涉及一種申嗪霉素發(fā)酵工藝，所述發(fā)酵工藝包括：向M18菌體發(fā)酵體系中補(bǔ)加碳源和/或氮源。所述碳源選自糖類、油脂、有機(jī)酸、有機(jī)酸酯或小分子醇。所述氮源選自無(wú)機(jī)氮源或有機(jī)氮源。所述無(wú)機(jī)氮源選自銨鹽，所述銨鹽優(yōu)選為硫酸銨或硝酸銨，所述有機(jī)氮源選自復(fù)合氨基酸粉或酰胺。本發(fā)明的申嗪霉素發(fā)酵工藝維持菌體的連續(xù)生長(zhǎng)和產(chǎn)物形成的需要，延緩菌體的衰老，將申嗪霉素大罐發(fā)酵周期延長(zhǎng)至65小時(shí)左右；延長(zhǎng)發(fā)酵產(chǎn)物PCA的合成與分泌周期，在延長(zhǎng)期發(fā)酵產(chǎn)物PCA的含量仍繼續(xù)大幅增長(zhǎng)，最高含量可達(dá)9.7g/L以上；大大提高了發(fā)酵產(chǎn)量，降低了生產(chǎn)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，特別是涉及一種申嗪霉素發(fā)酵工藝。

背景技術(shù)

申嗪霉素是一種吩嗪類農(nóng)用廣譜殺菌劑，化學(xué)名稱為吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid，簡(jiǎn)稱PCA)，是利用促生拮抗菌M18于發(fā)酵罐中深層培養(yǎng)再經(jīng)提取純化而得。該菌類屬熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)，已保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)：CGMCC NO.0462，在中國(guó)專利CN00119857.2中，發(fā)明人許煜泉、馮鎮(zhèn)泰描述了生物農(nóng)藥促生拮抗菌M18及其制備方法，該專利被參考并結(jié)合于本文中。

目前利用M18菌工業(yè)化生產(chǎn)PCA的整個(gè)發(fā)酵過程中，發(fā)酵前25小時(shí)左右為菌體生長(zhǎng)繁殖階段，大約75％的營(yíng)養(yǎng)成分C(還原糖)、N(氨基氮)被消耗，隨后進(jìn)入產(chǎn)物PCA的生物合成階段，發(fā)酵約40小時(shí)之后，營(yíng)養(yǎng)成分C基本消耗完畢，菌體生長(zhǎng)受到影響，開始衰老自溶，釋放出胞內(nèi)氨基氮和產(chǎn)物分解酶導(dǎo)致產(chǎn)物PCA的含量開始下降，發(fā)酵結(jié)束，發(fā)酵液中產(chǎn)物PCA含量為4.5g/L左右。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種申嗪霉素發(fā)酵工藝，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種申嗪霉素發(fā)酵工藝，所述發(fā)酵工藝包括：向M18菌體發(fā)酵體系中補(bǔ)加碳源和/或氮源。

優(yōu)選的，所述M18發(fā)酵體系選自以下方式獲得：

1)將M18菌體種子菌液接種至發(fā)酵搖瓶中獲得；

2)將M18菌體種子菌液接入種子罐中培養(yǎng)，待菌體濃度OD600達(dá)2.0以上時(shí)移種至大罐中發(fā)酵獲得。

優(yōu)選的，所述碳源選自糖類、油脂、有機(jī)酸或有機(jī)酸酯。

優(yōu)選的，糖類選自單糖或多糖，所述單糖優(yōu)選為葡萄糖，所述多糖優(yōu)選為蔗糖。

優(yōu)選的，所述氮源選自無(wú)機(jī)氮源或有機(jī)氮源。

優(yōu)選的，所述無(wú)機(jī)氮源選自銨鹽，所述銨鹽優(yōu)選為硫酸銨或硝酸銨，所述有機(jī)氮源選自復(fù)合氨基酸粉或酰胺。

優(yōu)選的，補(bǔ)加的碳源或氮源為各自的水溶液。

優(yōu)選的，當(dāng)發(fā)酵體系內(nèi)還原糖的含量或氨基氮的含量為起始質(zhì)量濃度的70％～75％時(shí)，補(bǔ)加入碳源或氮源。

優(yōu)選的，以發(fā)酵容器的培養(yǎng)基裝量體積為基數(shù)計(jì)量，補(bǔ)加的碳源總量為0.2％～1.0％，和/或，補(bǔ)加的氮源總量為0.2％～0.8％。

優(yōu)選的，補(bǔ)加碳源/或氮源的方式選自分次補(bǔ)加或持續(xù)補(bǔ)加。

如上所述，本發(fā)明的申嗪霉素發(fā)酵工藝，具有以下有益效果：

1)維持菌體的連續(xù)生長(zhǎng)和產(chǎn)物形成的需要，延緩菌體的衰老，將申嗪霉素大罐發(fā)酵周期延長(zhǎng)至65小時(shí)左右；

2)延長(zhǎng)發(fā)酵產(chǎn)物PCA的合成與分泌周期，在延長(zhǎng)期發(fā)酵產(chǎn)物PCA的含量仍繼續(xù)大幅增長(zhǎng)，最高含量可達(dá)9.7g/L以上；

3)大大提高了發(fā)酵產(chǎn)量，降低了生產(chǎn)成本。

附圖說明