[發明專利]一種通過外周血循環腫瘤細胞檢測前列腺癌患者E-Cadherin基因突變的方法

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• 申請號: 202010625871.8
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111638352A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 洪瑛;侯景陽;李文濤;李琛琛
• 申請（專利權）人: 山東凱歌智能機器有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/574;G01N33/569;B01D29/05
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本發明提供了一種檢測前列腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E?Cadherin基因突變的試劑盒及檢測方法，所述的試劑盒包括稀釋液、脫色液、染色液A、染色液B、鼠抗人E?Cadherin一抗、連接有辣根過氧化物酶的兔抗鼠二抗、0.1%Triton X?100、0.3%H₂O₂、試劑A；檢測方法為利用膜過濾裝置分離獲取外周血循環腫瘤細胞CTC，并運用免疫組化技術檢測外周血CTC的E?Cadherin表達情況。利用本發明提供的檢測方法，不用穿刺活檢獲取組織標本即可檢測到晚期或復發肝細胞癌患者E?Cadherin表達情況，利用微創技術，能夠實現實時動態檢測；采用本發明中分離裝置及稀釋液，循環腫瘤細胞分離好，避免血細胞的干擾，避免染色過程中可能產生的邊緣效應導致的假陽性結果，穩定性好，降低細胞的損失，提高檢測的準確性。

技術領域

本發明提供了一種檢測前列腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin基因突變的試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

在世界范圍內，前列腺癌發病率居男性惡性腫瘤第2位，癌癥特異性死亡居第6位。2015中國腫瘤登記年報顯示，2011年中國前列腺癌發病率居惡性腫瘤第9位，城市男性前列腺癌的發病率和死亡率在男性惡性腫瘤中分別居第6位和第9位。前列腺癌治療的難點是轉移性前列腺癌，尤其是內分泌治療后出現的去勢抵抗現象，目前轉移性前列腺癌去勢抵抗后的治療手段有限，并且會出現所有的常規治療手段（放療、化療、內分泌治療、靶向治療）都失效的情況。

隨著分子生物學的發展，中晚期前列腺細胞癌的免疫治療逐漸興起，初步的臨床試驗也取得了較好的療效，目前多項III期臨床試驗正在開展，E-鈣粘蛋白(E—Cadherin)是上皮細胞表型最經典的標志物，E-Cadherin表達的下調標志著細胞之間粘附能力的下降，因此E-Cadherin被當做鑒定前列腺癌E-Cadherin發生的主要手段之一，作為一類細胞表面糖蛋白，E-Cadherein在細胞-細胞之間的粘附中發揮重要作用，并參與組織器官的維持。近年來有關于前列腺癌E-Cadherin和腫瘤耐藥之間的關系日益受到重視，大量研究顯示在不同的腫瘤當中由于EMT的發生而同時耐藥性的升高，并且都伴隨著E-Cadherin表達的改變。目前，國內外前列腺癌診治指南均認為：前列腺癌E-Cadherin突變檢測的時間點包括初診時及爭取在疾病進展時再次檢測，應通過重復檢測減少假陽性和假陰性。

循環腫瘤細胞（Circulating tumor cell，CTC）是從實體腫瘤脫落進入外周血液循環的腫瘤細胞，自1989年被發現以來，目前已有多種方法用于外周血循環腫瘤細胞的檢測。近期研究表明，其檢測對于評估腫瘤患者尤其是晚期腫瘤患者的預后以及選擇合適的個體化治療具有重要的臨床意義。因CTC檢測具有微創、實時檢測等特點，被稱為腫瘤的“液態活檢”。

針對目前臨床實踐中，前列腺癌患者E-Cadherin檢測的標本主要為腫瘤組織，來源于手術或穿刺活檢，很難做到多次或實時檢測。因此，檢測循環腫瘤細胞(CTC)E-Cadherin表達情況對前列腺癌預后及免疫治療療效評估具有重要價值。