[發明專利]一種板栗胚軸超低溫保存和恢復培養方法在審
| 申請號： | 202010622769.2 | 申請日： | 2020-07-01 |
| 公開（公告）號： | CN111685109A | 公開（公告）日： | 2020-09-22 |
| 發明（設計）人： | 韓彪;咸洋;解孝滿;李文清;陸璐;董昕;劉鹍;劉濤;陳吉強 | 申請（專利權）人： | 山東省林木種質資源中心 |
| 主分類號： | A01N3/00 | 分類號： | A01N3/00;A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363 | 代理人： | 逯長明;許偉群 |
| 地址： | 250102 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 板栗 胚軸 超低溫 保存 恢復 培養 方法 | ||
1.一種板栗胚軸超低溫保存方法，其特征在于，所述方法包括：
步驟一：切取板栗中含有胚軸的大塊組織，對所述大塊組織塊進行表面消毒，然后切取超低溫貯藏所需胚軸組織，對所述胚軸組織脫水；
步驟二：將脫水后的胚軸組織，放入經滅菌的凍存管中，加入上載液，做加載處理；
步驟三：加載處理結束后，移除上載液，加入預冷的PVS2溶液，做玻璃化處理；
步驟四：將經玻璃化處理后含胚軸組織的凍存管快速放入生物樣品液氮罐貯藏，做超低溫儲藏處理；
步驟五：超低溫儲藏處理后，對胚軸進行解凍處理；
步驟六：對解凍處理后的凍存管消毒，吸盡PVS2溶液，加入卸載液，做卸載處理。
2.根據權利要求1所述的板栗胚軸超低溫保存方法，其特征在于，所述上載液組成為：2M甘油+0.4M蔗糖，溶解于WPM基礎培養基，調整溶液pH＝5.8。
3.根據權利要求1所述的板栗胚軸超低溫保存方法，其特征在于，所述PVS2溶液組成為：30％甘油+15％乙二醇+15％二甲基亞砜+0.4mol/L蔗糖，溶解于WPM基礎培養基，調整溶液pH＝5.8。
4.根據權利要求1所述的板栗胚軸超低溫保存方法，其特征在于，所述卸載液組成為：1.2M蔗糖，溶解于WPM基礎培養基，調整溶液pH＝5.8。
5.一種板栗胚軸超低溫保存后恢復培養方法，其特征在于，經由權利要求1-4任一項所述的板栗胚軸超低溫保存方法處理后獲得的板栗胚軸做恢復培養，所述恢復培養方法包括：
板栗胚軸卸載處理結束后，吸盡卸載液，加入WPM基礎培養基清洗，再吸盡WPM基礎培養基，之后將胚軸轉接在超低溫恢復培養基上。
6.根據權利要求5所述的板栗胚軸超低溫保存后恢復培養方法，其特征在于，所述恢復培養基組成為：WPM+1.5mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)+0.1mg/L萘乙酸(NAA)+1g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)+1g/L活性炭+30g/L蔗糖+3g/L瓊脂(Agar)，調整溶液pH＝5.8。
7.一種板栗胚軸幼苗組織培養基，其特征在于，所述培養基組成為：DKW+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+IBA 0.04mg/L。
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