[發明專利]歸巢靶向RSGRVSN肽修飾的聚乙二醇-聚多巴胺-普魯士藍復合納米粒子及制備方法在審
| 申請號： | 202010620758.0 | 申請日： | 2020-07-01 |
| 公開（公告）號： | CN111821469A | 公開（公告）日： | 2020-10-27 |
| 發明（設計）人： | 苗婭莉;文繼銳;吳江;趙志偉;王領;成娟;黃立維;楊炎霖 | 申請（專利權）人： | 四川大學 |
| 主分類號： | A61K47/69 | 分類號： | A61K47/69;A61K47/64;A61K41/00;A61P35/00;B82Y5/00;B82Y30/00;B82Y40/00 |
| 代理公司： | 成都華辰智合知識產權代理有限公司 51302 | 代理人： | 秦華云;李揚 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 歸巢 靶向 rsgrvsn 修飾 聚乙二醇 多巴胺 普魯士 復合 納米 粒子 制備 方法 | ||
1.一種歸巢靶向RSGRVSN肽修飾的聚乙二醇-聚多巴胺-普魯士藍復合納米粒子的制備方法，其特征是包括如下步驟：
A、制備普魯士藍納米粒子：將FeCl3·6H2O加入到去離子水中并在60℃溫度下攪拌使其溶解，然后加入檸檬酸攪拌并得到混合溶液A；在混合溶液A攪拌的同時滴加K4[Fe(CN)6]溶液，將滴加后的溶液保持在溫度60℃，并在攪拌條件下反應；向反應后的溶液加入相同體積的丙酮，并在12300rpm離心轉速條件下離心洗滌若干次，得到沉淀物在50℃溫度下干燥處理，最后得到普魯士藍納米粒子；
B、聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子：將鹽酸多巴胺溶解在pH＝8.5的Tris-HCl緩沖溶液中得到混合溶液B，在光照有氧的溫和攪拌條件下，將合成的普魯士藍納米粒子溶解到混合溶液B中反應；然后將反應溶液在16300rpm離心轉速條件下離心并得到沉淀物，將沉淀物重新分散到去離子水中，然后再用去離子水離心洗滌若干次得到聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子，并將聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子分散在二甲基亞砜中備用；
C、RSGRVSN肽-聚乙二醇-巰基的合成：按照RSGRVSN肽:馬來酰亞胺-聚乙二醇-巰基＝1：8.9，分別稱取適量RSGRVSN肽和馬來酰亞胺-聚乙二醇-巰基溶于磷酸鹽緩沖液中，再將上述混合溶液放入西林瓶中，通氮氣，室溫避光磁力攬拌反應4h，即得RSGRVSN肽-聚乙二醇-巰基，然后采用超濾管除去未連接的RSGRVSN肽；
D、歸巢靶向RSGRVSN肽修飾的聚乙二醇-聚多巴胺-普魯士藍復合納米粒子的制備：將聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子分散在pH為8.5～12的弱堿水溶液中，然后加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.1～1mg/mL，再加入靶向配體RSGRVSN肽-聚乙二醇-巰基使濃度為0.1～10mg/mL；然后反應3～12小時，并在10000～20000rpm離心轉速條件離心后收集納米粒子，用去離子水洗滌納米粒子，冷凍干燥得到RSGRVSN肽修飾的聚乙二醇-聚多巴胺-普魯士藍復合納米粒子。
2.按照權利要求1所述的歸巢靶向RSGRVSN肽修飾的聚乙二醇-聚多巴胺-普魯士藍復合納米粒子的制備方法，其特征在于：
A、制備普魯士藍納米粒子：將5～6mg的FeCl3·6H2O加入到19～22mL的去離子水中并在60℃溫度下攪拌使其溶解，然后加入97.5～99.5mg檸檬酸攪拌并得到混合溶液A；在混合溶液A攪拌的同時滴加19～22mL的K4[Fe(CN)6]溶液，將滴加后的溶液保持在溫度60℃，并在攪拌條件下反應5～6min；向反應后的溶液加入相同體積的丙酮，并在12300rpm離心轉速條件下離心洗滌三次，得到沉淀物在50℃溫度下干燥處理，最后得到普魯士藍納米粒子；
B、聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子：將24～26mL鹽酸多巴胺溶解在pH＝8.5的9.5～10.5mL的Tris-HCl緩沖溶液中得到混合溶液B，在光照有氧的溫和攪拌條件下，將合成的4.9～5.3mg普魯士藍納米粒子溶解到混合溶液B中反應6～7h；然后將反應溶液在16300rpm離心轉速條件下離心15min以上并得到沉淀物，將沉淀物重新分散到去離子水中，然后再用去離子水離心洗滌三次得到聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子，并將聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子分散在2.0mL二甲基亞砜中備用；
C、RSGRVSN肽-聚乙二醇-巰基的合成：根據RSGRVSN肽和馬來酰亞胺-聚乙二醇-巰基的分子量可計算出RSGRVSN肽末端半胱氨酸所含巰基的摩爾數及聚合物末端馬來酰亞胺基團的摩爾數，利用聚乙二醇一端的馬來酰亞胺基與多肽的巰基反應進行靶向肽的修飾，按照RSGRVSN肽:馬來酰亞胺-聚乙二醇-巰基＝1：8.9，分別稱取適量RSGRVSN肽和馬來酰亞胺-聚乙二醇-巰基溶于磷酸鹽緩沖液中，再將上述混合溶液放入西林瓶中，通氮氣，室溫避光磁力攬拌反應4h，即得RSGRVSN肽-聚乙二醇-巰基，然后采用超濾管除去未連接的RSGRVSN肽；
D、歸巢靶向RSGRVSN肽修飾的聚乙二醇-聚多巴胺-普魯士藍復合納米粒子的制備：將聚多巴胺包覆普魯士藍納米粒子分散在pH為8.5～12的弱堿水溶液中，然后加入三(2-羧乙基)膦使濃度為0.1～1mg/mL，再加入靶向配體RSGRVSN肽-聚乙二醇-巰基使濃度為0.1～10mg/mL；然后反應3～12小時，并在10000～20000rpm離心轉速條件離心后收集納米粒子，用去離子水洗滌納米粒子，冷凍干燥得到RSGRVSN肽修飾的聚乙二醇-聚多巴胺-普魯士藍復合納米粒子。
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