[發明專利]一種人工心肌組織纖維化模型、制備方法、制備裝置及其應用

有效

• 申請號: 202010620164.X
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111718895B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 張冬卉;楊鵬程;龔吉星
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0735;C12Q1/02;A61K45/00;A61P9/00;C12M3/00;C12M1/24
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 尹小燕

1.一種高通量藥物篩選人工心肌組織纖維化模型的制備方法，包括：

切去多孔PCR管每個管的底部，并在每個切口處固定環狀紙環，制得多孔EHT支架裝置；

制備PDMS EHT成型模具，所述成型模具包括與所述多孔PCR管對應的圓形凹槽；所述PDMS EHT成型模具的制備方法包括：首先制備EHT成型裝置陽模，所述陽模上分布有與多孔PCR管對應的多個圓柱；將PDMS原液與交聯劑混合后，倒入放有所述陽模的器皿中，固化后，分離陽模，去除多于的PDMS，即得帶有圓形凹槽的PDMS EHT成型模具；

在EHT成型模具的凹槽中央插入損傷器，制成EHT損傷裝置；

在另外的EHT成型模具的凹槽中加入水凝膠心肌組織液，所述水凝膠心肌組織液的制備方法：將心肌細胞消化、胰酶酶解后得到單細胞，用水凝膠培養A液重懸并加入包含Fibronectin和Matrigel水凝膠培養B液，組成水凝膠心肌組織液；所述水凝膠培養A液包括A液Ⅰ：Low Glucose DMEM、 10％ FBS、 1％ PS、 終濃度2μg/mL 維生素B12、終濃度1mg/mL氨基乙酸，將58μL A液Ⅰ與2.4μL thrombin 50U/mL 混合即可；所述水凝膠培養B液包括B液Ⅰ：Low Glucose DMEM 、20％FBS 、 1％PS 、終濃度4μg/mL 維生素B12 、終濃度2mg/mL氨基乙酸，將24μL B液Ⅰ與 24μL Fibronectin、12μL Matrigel混合組成水凝膠培養B液；

將多孔EHT支架裝置放在EHT成型模具上，并使紙環浸入凹槽的水凝膠心肌組織液中，培養，一次性得到多個相互獨立的EHT；

將EHT損傷裝置冷凍后，使損傷器插入多孔EHT支架裝置，每根損傷針對應每個孔的EHT中心，得到高通量藥物篩選人工心肌組織纖維化模型。

2.如權利要求1所述的制備方法制備的人工心肌組織纖維化模型在心肌組織纖維化治療或診斷的藥物篩選中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：應用方法包括將所得人工心肌組織纖維化模型置于含有待測藥物的培養基中培養，通過觀察損傷愈合情況判斷藥物效果；所述待測藥物為Y27632。

4.根據權利要求1所述的一種高通量藥物篩選人工心肌組織纖維化模型的制備方法中的制備裝置，其特征在于：包括插入式培養支架，所述插入式培養支架上設有多個端部開口的中空管，每個所述中空管的開口端設有紙環，所述紙環內徑小于所述中空管的開口端內徑；

還包括與所述插入式培養支架配套使用的組織片成型裝置陰模，所述成型裝置陰模上設有供多個所述中空管插入的凹槽，所述凹槽內承裝有組織液，所述中空管插入所述凹槽內，所述紙環浸沒在組織液中，組織液固化后，組織片被支撐在紙環內；

還包括與所述插入式培養支架配套使用的組織片損傷裝置，所述損傷裝置上設有供多個所述中空管插入的損傷凹槽，所述損傷凹槽中部豎直設有柱狀的損傷器，所述插入式培養支架的中空管插入所述損傷裝置中，所述損傷器穿過被支撐在紙環內的組織片。