[發明專利]一種檢測SARS-CoV-2核酸的引物組合物、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 202010619152.5
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111926112A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 方雪恩;李楊;祁軍;孔繼烈
• 申請（專利權）人: 上海速創診斷產品有限公司;天津國際旅行衛生保健中心（天津海關口岸門診部）
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 郎祺

本發明公開了一種檢測SARS?CoV?2核酸的引物組合物、試劑盒和方法。該引物組合物包括SEQ ID NO：1?SEQ ID NO：6所示序列的引物，或者包括SEQ ID NO：7?SEQ ID NO：11所示序列的引物。將含有上述引物組合物的引物液預先裝進微流控芯片，組裝成試劑盒。利用試劑盒的成分，在該微流控芯片中形成小體積旋轉微流控熒光系統對SARS?CoV?2核酸進行檢測。該引物組合物特異性強、靈敏度高，該試劑盒和方法具有快速高效、操作簡便、抗干擾性強、重復性高、鑒定簡便的優點，適合于口岸和現場檢測。

技術領域

本發明涉及核酸檢測領域，尤其涉及一種檢測SARS-CoV-2核酸的引物組合 物、試劑盒和方法。

背景技術

2020年3月18日，美國梅里埃的COVID-19檢測試劑盒獲批美 國FDA應急使用EUA授權，用于新型冠狀病毒的快速檢測，該測試在其 2.0設備平臺上運行，檢測時間為45min，3月21日，美國賽沛宣 布其Xpert SARS-CoV-2核酸檢測試劑獲得EUA授權，用于進行SARS-CoV-2病 毒核酸的定性檢測，檢測時間為30min。3月28日，美國雅培宣布，FDA授予其 用于檢測新型冠狀病毒病(COVID-19)的分子即時檢測(point-of-caretest，POCT) 產品雅培ID NOW緊急使用授權(EUA)。這一檢測在短短五分鐘內就可給出陽性結果，在13分鐘內給出陰性結果，是目前報道速度最快的即時檢測。

微流控芯片技術是20世紀90年代初由瑞士的Manz和Widmer提出的以微 機電加工技術為基礎的“微型全分析系統”(miniaturized total analysis system， μTAS)上逐步發展起來的一項嶄新學科和技術。哈佛大學Whitesides,GM教授 對該學科的定義是：微流控芯片是一門在微米尺度結構中操控納升至皮升體積流 體的技術與科學。該技術的優勢之一是增大了小體積反應腔的比表面積和腔體內 生化反應的傳質傳熱效應，可有效實現快速反應動力學效應。目前尚未有采用微 流控芯片技術用于SARS-CoV-2核酸檢測的報告。

綜上所述，目前分子生物學技術的發展為病原體的早期診斷創造了條件，目 前應用于臨床診斷的主要是PCR技術，包括以PCR為基礎衍生出的多種技術： 包括反轉錄PCR(RT-PCR)、多重PCR、巢式PCR、RAPD技術、實時熒光定 量PCR等。然而，上述檢測方法存在檢測周期長、檢測體系和操作過程比較復 雜，難以實行現場檢測等問題，且需要專業人員操作。另外，PCR儀價格昂貴， 擴增時間較長。因此，在科學研究和生產實踐中均需要一種快速簡便、容易普及、 安全可靠且適用于現場操作的檢測方法，尤其檢測速度快對于疫情防控至關重要。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種檢測SARS-CoV-2核酸的引物組合 物、試劑盒和方法，利用微流控小體積效應，實現反應腔體中有效的恒溫擴增反 應，并應用于SARS-CoV-2核酸的快速有效分析。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明的第一方面是提供一種檢測SARS-CoV-2核酸的引物組合物，包括 SEQ IDNO：1-SEQ ID NO：6所示序列的引物，或者包括SEQ ID NO：7-SEQ ID NO：11所示序列的引物。

本發明的第二方面是提供一種檢測SARS-CoV-2核酸的試劑盒，包括反應液、 微流控芯片、陽性對照、陰性對照、內標物和芯片封口膜；

其中，該微流控芯片里含有引物液，該引物液包括如第一方面的引物組合物。

進一步地，上述反應液還包括反轉錄酶、Bst DNA酶、dNTPs、10×等溫擴 增反應緩沖液、熒光染料和鎂離子溶液。