[發明專利]一種檢測SARS-CoV-2核酸的引物組合物、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 202010619152.5
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111926112A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 方雪恩;李楊;祁軍;孔繼烈
• 申請（專利權）人: 上海速創診斷產品有限公司;天津國際旅行衛生保健中心（天津海關口岸門診部）
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 郎祺

1.一種檢測SARS-CoV-2核酸的引物組合物，其特征在于，包括SEQ ID NO：1-SEQ IDNO：6所示序列的引物，或者包括SEQ ID NO：7-SEQ ID NO：11所示序列的引物。

2.一種檢測SARS-CoV-2核酸的試劑盒，其特征在于，包括反應液、微流控芯片、陽性對照、陰性對照、內標物和芯片封口膜；

所述微流控芯片里含有引物液，所述引物液包括包括如權利要求1所述的引物組合物。

3.根據權利要求2所述的檢測SARS-CoV-2核酸的試劑盒，其特征在于，所述反應液包括反轉錄酶、Bst DNA聚合酶、dNTPs、10×等溫擴增反應緩沖液、熒光染料和鎂離子溶液。

4.根據權利要求2所述的檢測SARS-CoV-2核酸的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含10⁵copies/mL目的片段的假病毒，所述陰性對照為生理鹽水，所述內標物為含10⁵copies/mL內標片段的假病毒。

5.根據權利要求2所述的檢測SARS-CoV-2核酸的試劑盒，其特征在于，所述引物組合物中的每種引物在所述引物液中的濃度為48～52μM；所述Bst DNA聚合酶的濃度為8U/μl，dNTP的濃度為12mM；熒光染料濃度為1×SYBR Green I，反轉錄酶的濃度為5U/μl，鎂離子溶液的濃度為8mM。

6.根據權利要求1所述的檢測SARS-CoV-2核酸的試劑盒，其特征在于，所述dNTPs、10×等溫擴增反應緩沖液和鎂離子溶液的體積比是(7～9):(4～6):2。

7.一種采用權利要求2-6任一項所述試劑盒來檢測SARS-CoV-2核酸的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，將內標物加入待測樣本中，采用核酸提取試劑盒提取待測樣本的核酸；

步驟二，將所述待測樣本的核酸、陽性對照或陰性對照和所述反應液混合，然后旋渦振蕩混勻，瞬時離心后全部加到所述微流控芯片的加樣孔中，用封口膜封住所述加樣孔，刮平壓緊封口膜；

步驟三，將微流控芯片放入微流控芯片檢測儀中，設置反應條件進行擴增反應；

步驟四，檢測結果的判定。

8.根據權利要求7所述的檢測SARS-CoV-2核酸的方法，其特征在于，所述待測樣本的核酸、陽性對照或陰性對照的體積為5μL，所述反應液的體積為25μL。

9.根據權利要求7所述的檢測SARS-CoV-2核酸的方法，其特征在于，所述檢測結果的判定采用以下標準：

靶標和內標Ct值≤36，判定為陽性；

靶標和內標Ct值顯示為“-”或者＞36，判定為陰性。