[發明專利]一種大規模快速生產病毒載體的方法在審
| 申請號： | 202010614392.6 | 申請日： | 2020-06-30 |
| 公開（公告）號： | CN111876392A | 公開（公告）日： | 2020-11-03 |
| 發明（設計）人： | 石先燈;李進;吳健華 | 申請（專利權）人： | 恒瑞源正（上海）生物科技有限公司;恒瑞源正（廣州）生物科技有限公司;恒瑞源正（深圳）生物科技有限公司;恒瑞源正（北京）生物醫藥有限公司 |
| 主分類號： | C12N7/02 | 分類號： | C12N7/02;C12N15/867 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 陸惠中;田歡 |
| 地址： | 200120 上海市浦東新區中國（上海*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 大規模 快速 生產 病毒 載體 方法 | ||
1.一種生產病毒載體的方法，其特征在于，包括：
S1：使用濾器對含有慢病毒載體的細胞培養液進行過濾澄清；
S2：將S1得到的澄清液進行超濾濃縮和換液，得到濃縮后的慢病毒載體；
S3：將S2得到的慢病毒濃縮液添加核酸酶進行消化；
S4：將S3消化過的樣品上樣Sepharose 6FF層析柱，收集第一個吸收峰；
S5：將S4收集到的樣品上樣陰離子交換層析柱，使用洗脫液洗脫收集；
S6：將S5收集到的樣品進行超濾濃縮和換液，即得到慢病毒載體。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S1中，使用0.65或0.45μm玻璃纖維濾器進行過濾澄清。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S2中，超濾膜截留分子量是100-500KD。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，將得到的慢病毒濃縮液使用包含全能核酸酶的消化反應液進行消化；優選的，消化反應液包括：10-100mM Tris-Cl，1-10mMMgCl2和5-200U/ml全能核酸酶；優選的，消化反應條件為：在37℃下反應30-120分鐘。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S4中，將消化后的樣品上樣到預先平衡過的Sepharose 6FF層析柱；平衡層析柱緩沖液中Tris-Cl濃度為10-100mM，NaCl濃度為10-300mM，pH值為7-9。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S5中，將S4得到的樣品直接上樣到預先平衡好的Mustang Q膜層析柱，使用洗脫液洗脫，收集第一個吸收峰后使用培養基進行稀釋，稀釋3-5倍；優選的，培養基為DMEM培養基。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，使用的平衡層析柱緩沖液中Tris-Cl濃度為10-100mM，NaCl濃度為10-300mM，pH值為7-9；優選的，洗脫液中Tris-Cl濃度為10-100mM，NaCl濃度為0.3-1.0M，pH值為7-9。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S6中，超濾膜截留分子量是50-300KD。
9.根據權利要求1-8任一項所述的方法得到的慢病毒載體。
10.一種產品，其特征在于，所述產品包括權利要求9所述的慢病毒載體。
11.根據權利要求9所述的慢病毒載體或權利要求10所述的產品在基因治療領域中的應用。
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