[發明專利]一種江西鉛山紅芽芋多倍體包埋誘導的方法

有效

• 申請號: 202010613699.4
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111642400B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 尹明華;魏杰;洪森榮
• 申請（專利權）人: 上饒師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 謝秀娟

本發明公開一種江西鉛山紅芽芋多倍體包埋誘導的方法，取紅芽芋單芽用含有秋水仙素、殼寡糖、石墨烯量子點的培養液浸泡；經過浸泡的單芽用含有秋水仙素、殼寡糖、碳納米管的培養液浸泡；經過浸泡的單芽與含有海藻酸鈉和蔗糖的無鈣離子改良培養液混合，得混合液；滴入含有秋水仙素、殼寡糖、石墨烯量子點、碳納米管、氯化鈣和蔗糖的培養液中包埋；包埋珠接種在固體培養基中培養；將發生變異的紅芽芋單芽分離出來，接種至固體培養基上，繼代培養3?4次，得到江西鉛山紅芽芋多倍體叢生芽；叢生芽長到2?3cm時，將單芽切下來轉接至生根培養基中培養得到江西鉛山紅芽多倍體試管苗。本發明紅芽芋多倍體包埋誘導的頻率高達86.4％。

技術領域

本發明涉及多倍體誘導技術領域，具體涉及一種江西鉛山紅芽芋多倍體包埋誘導的方法。

背景技術

江西鉛山紅芽芋皮色鮮艷，頂芽紅色，肉質細嫩，易煮爛而不糊，營養豐富，含多種微量元素，是芋中之珍品，一直是國內外市場上緊俏的搶手貨，是鉛山縣的拳頭產品。目前，隨著生產不斷發展，植株無性繁殖積累病毒逐漸增多，江西鉛山紅芽芋品種普遍出現早衰現象，病害嚴重，產量和品質下降。因而，優良品種的選育已成為江西鉛山紅芽芋生產急需解決的問題。多倍體一般具有生長旺盛、產量高、適應性和抗逆性強等特點，且能夠利用無性繁殖的方式固定其優良性狀，使之保持穩定而不分離，所以多倍體育種一直被認為是創造蔬菜新品種的重要途徑。專利CN103262792公開了一種江西鉛山紅芽芋多倍體誘導的方法，以江西鉛山紅芽芋為試材，通過秋水仙素誘變技術，獲得紅芽芋多倍體新種質，并從細胞學方面對其進行鑒定，對充分發揮和利用我國地方紅芽芋資源優勢，保護、開發我國道地蔬菜和豐富特色蔬菜種類有重要意義。然而，其誘導率僅僅為20.5％，并不能滿足當今社會的需求。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種江西鉛山紅芽芋多倍體包埋誘導的方法使紅芽芋多倍體包埋誘導的成活率提高至86.4％，且包埋誘導的多倍體紅芽芋品質優良且抗逆性較強。

一種江西鉛山紅芽芋多倍體包埋誘導的方法，包括以下步驟：

(1)取江西鉛山紅芽芋單芽用含有秋水仙素、殼寡糖、石墨烯量子點的MS培養液a浸泡；以使秋水仙素誘導江西鉛山紅芽芋單芽形成多倍體。

(2)步驟(1)經過浸泡的江西鉛山紅芽芋單芽用含有秋水仙素、殼寡糖、碳納米管的MS培養液b浸泡；

(3)將步驟(2)經過浸泡的江西鉛山紅芽芋單芽與含有海藻酸鈉和蔗糖的無鈣離子改良MS培養液c混合，得混合液；經過步驟(2)和步驟(3)的分階段浸泡可以使芽更加有效的形成多倍體。

(4)將步驟(3)混合液滴入含有秋水仙素、殼寡糖、石墨烯量子點、碳納米管、氯化鈣和蔗糖的MS培養液d中進行包埋得紅芽芋單芽包埋珠；將經過三步浸泡形成的多倍體進行浸泡后包埋，包埋的作用是使石墨烯量子點和碳納米管吸附營養，穩定形成多倍體的效果并為多倍體提供充足的營養，增強秋水仙素的多倍體的誘導效果；充分發揮殼寡糖對多倍體的促進作用。

(5)將步驟(4)制備的紅芽芋單芽包埋珠接種在MS固體培養基中培養；

(6)將形態上發生明顯變異的紅芽芋單芽從包埋珠中分離出來，并接種至MS固體培養基上，繼代培養3-4次后，即可得到江西鉛山紅芽芋多倍體叢生芽；形態上變異即莖葉變得粗壯，并通過染色體數目鑒定，獲得多倍體；將包埋珠剝離將芽分離出來再進行接種的有助于接種到新培養基的多倍體進行增殖并進一步形成叢生芽。

繼代培養過程：將紅芽芋多倍體芽接種到MS固體培養基上，放置于培養條件光照時間14h/d，光強1500-2000lx，培養溫度25±2℃的條件下，培養60天后，再次將紅芽芋多倍體芽分離，接種到MS固體培養基上，放置于培養條件光照時間14h/d，光強1500-2000lx，培養溫度25±2℃的條件下，如此繼代培養3-4次。

(7)當步驟(6)多倍體叢生芽長到2-3cm時，將單芽切下來轉接至生根培養基中培養，得到江西鉛山紅芽芋多倍體試管苗。