[發明專利]一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒1型分離株感染性克隆構建、拯救與應用

在審

• 申請號: 202010611744.2
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111676247A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 陳南華;李樹濱;朱建中
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/40;C12N7/00;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 沈志海

1.一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒1型分離株感染性克隆構建，其特征是，提供一種重組載體，包含PRRSV1基因組全長cDNA序列，該全長cDNA序列的5’端加有巨細胞病毒真核啟動子序列，3’端Poly(A)尾下游加有丁肝炎病毒核酶序列以及牛生長激素多聚腺苷酸信號轉錄終止序列；

所述載體為pACYC177低拷貝載體，經過基因合成和同源重組在pACYC177載體上插入五個單一限制性酶切位點SgsI, Pfl23II,BglII，Bsp1407I和XbaI，用于PRRSV1弱毒株HLJB1的感染性克隆構建。

2.根據權利要求1所述的一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒1型分離株感染性克隆拯救，其特征是，將上述重組載體與高效轉染試劑混合后可直接轉染BHK-21細胞后再感染PAM細胞，以拯救獲得HLJB1感染性克隆病毒。

3.如權利要求1所述一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒1型分離株的應用，其特征是，提供一種人工克隆的PRRSV1野毒株在研究PRRSV1毒株Marc-145細胞適應性上的應用：利用感染性克隆平臺，通過將不能適應Marc-145的PRRSV野毒株與能適應Marc-145細胞的PRRSV1疫苗株進行相應基因片段替換，解析決定PRRSV1野毒株Marc-145細胞適應性的相關基因及關鍵位點。

4.如權利要求1所述一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒1型分離株的應用，其特征是，提供一種人工改造的PRRSV1弱毒疫苗候選株，所述人工改造的弱毒疫苗候選株是PRRSV1弱毒株HLJB1的感染性克隆病毒，該人工改造弱毒疫苗候選株可應用于制備新型PRRSV1基因工程疫苗。