[發(fā)明專利]一種砂梨組培苗無菌培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010610525.2
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111758568A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 涂俊凡;秦仲麒;李先明;伍濤;楊夫臣;朱紅艷;劉政;楊立;程寅勝;聶顯雙
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G17/00;A01G2/10;A01G24/10;A01G24/28;A01G24/15
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50230
• 代理人: 陳炳萍

本發(fā)明公開了一種砂梨組培苗無菌培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟：步驟一：基質(zhì)的制備；步驟二：材料的獲得；步驟三：植株溫室生長條件；步驟四：試驗材料處理；步驟五：試驗材料消毒；步驟六：初代誘導(dǎo)：將消毒好的莖段剪除兩端后剪成單芽莖段，接種到MS+1.0～2.0mg/L6?BA+0.1～0.2mg/LIBA的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)腋芽，暗培養(yǎng)后轉(zhuǎn)到光照條件下培養(yǎng)；步驟七：增殖培養(yǎng)：初代誘導(dǎo)得到的健壯腋芽切下接種到MS+1.0～3.0mg/L6?BA+0.1～0.3mg/LIBA的培養(yǎng)基中進行腋芽的增殖培養(yǎng)。本發(fā)明具有操作簡單、污染率低、腋芽長勢好、培養(yǎng)周期可縮短到30d以內(nèi)的優(yōu)點，極顯著解決了砂梨初代培養(yǎng)腋芽誘導(dǎo)難的問題，為砂梨后期生物技術(shù)研究奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及砂梨組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種砂梨組培苗無菌培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

砂梨是我國四個梨栽培種之一，主要在我國溫暖多雨的長江流域種植，種質(zhì)資源豐富，栽培歷史悠久，果實大，肉質(zhì)細嫩，風(fēng)味濃甜，成熟期多樣，結(jié)果早，豐產(chǎn)性強，受到市場和梨農(nóng)的歡迎。具有耐熱、抗旱、高度抵抗火疫病等優(yōu)異性狀。

目前，我國砂梨產(chǎn)業(yè)在政府的支持及科研院所、企業(yè)、合作社、種植大戶、果農(nóng)的努力下，取得了長足的發(fā)展。但在生產(chǎn)中仍存在著許多亟待解決的問題，比如果實品質(zhì)需要提高，缺乏抗病性強、耐貯藏好的品種等。由于梨基因的高度雜合性，傳統(tǒng)的梨育種方法改變目標(biāo)性狀周期長、工作量大。隨著植物組織培養(yǎng)和基因工程技術(shù)的不斷進步，利用生物技術(shù)進行育種已成為可能。通過細胞培養(yǎng)獲得既具有母體優(yōu)良性狀又能特異表達新基因性狀的植株，通過基因工程技術(shù)有目的地改變單個性狀而不影響其他優(yōu)良性狀。砂梨同其它木本果樹一樣，組織培養(yǎng)存在較大的困難。初代培養(yǎng)外植體消毒非常難，容易污染，無菌苗獲得效率低，嚴(yán)重限制了砂梨生物技術(shù)研究進程。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述問題，本發(fā)明提供了一種砂梨組培苗無菌培養(yǎng)方法，具有操作簡單、污染率低、腋芽長勢好、培養(yǎng)周期可縮短到30d以內(nèi)的優(yōu)點，極顯著解決了砂梨初代培養(yǎng)腋芽誘導(dǎo)難的問題，為砂梨后期生物技術(shù)研究奠定了基礎(chǔ)。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種砂梨組培苗無菌培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟：

步驟一：基質(zhì)的制備：基質(zhì)的組分為園土：草炭：珍珠巖2:2:1，基質(zhì)通過多菌靈消毒，晾25d～30d后備用；裝入塑料盆中，塑料盆規(guī)格為高45cm～50cm，直徑55cm～60cm；

步驟二：材料的獲得：落葉后萌芽前將大田繁育的1年生砂梨苗，在苗中上部飽滿芽處短截，移栽入裝有消過毒的基質(zhì)的塑料盆中；

步驟三：植株溫室生長條件：全光照，噴霧保持基質(zhì)水分；

步驟四：試驗材料處理：將半木質(zhì)化的帶芽莖段切成5cm～8cm長的莖段，每個莖段2個～3個腋芽，保留少量葉柄，用洗潔精清洗1遍～2遍，再用流水沖洗至少1h；

步驟五：試驗材料消毒：將流水沖洗之后的砂梨半木質(zhì)化的帶芽莖段用70％的酒精浸泡30s，無菌水沖洗3次，再用0.1％的升汞消毒8min～10min，最后無菌水沖洗3次；

步驟六：初代誘導(dǎo)：將消毒好的莖段剪除兩端后剪成單芽莖段，接種到MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.1～0.2mg/LIBA的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)腋芽，暗培養(yǎng)2d～3d后轉(zhuǎn)到光照條件下培養(yǎng)；

步驟七：增殖培養(yǎng)：初代誘導(dǎo)得到的健壯腋芽切下接種到MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.1～0.3mg/LIBA的培養(yǎng)基中進行腋芽的增殖培養(yǎng)。

本發(fā)明的優(yōu)點如下：

本發(fā)明具有操作簡單、污染率低、腋芽長勢好、培養(yǎng)周期可縮短到30d以內(nèi)的優(yōu)點，極顯著解決了砂梨初代培養(yǎng)腋芽誘導(dǎo)難的問題，為砂梨后期生物技術(shù)研究奠定了基礎(chǔ)。

具體實施方式