[發明專利]新型冠狀病毒IgG和IgM抗體檢測試劑盒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010607573.6
• 申請日: 2020-06-29
• 公開（公告）號: CN111751527A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 彭潔;嚴俊;張變強;王麗嬌
• 申請（專利權）人: 丹娜（天津）生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/52
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種新型冠狀病毒IgG和IgM抗體檢測試紙條，其特征在于，所述試紙條包括底板和在所述底板上順次搭接粘貼的樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；

所述膠體金墊上涂覆有膠體金標記核衣殼蛋白、膠體金標記棘突蛋白和膠體金標記兔IgG抗體復合物；

所述硝酸纖維素膜上設有IgG抗體檢測線和IgM抗體檢測線。

2.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述膠體金墊的膠體金標記核衣殼蛋白、膠體金標記棘突蛋白和膠體金標記兔IgG抗體的摩爾比為(1～5):(1～5):1；

優選地，所述膠體金標記核衣殼蛋白、膠體金標記棘突蛋白和膠體金標記兔IgG抗體復合物在膠體金墊上的噴涂量為10～20μL/cm。

3.根據權利要求1或2所述的試紙條，其特征在于，所述IgG抗體檢測線上包被有抗人IgG抗體；

優選地，所述抗人IgG抗體的包被濃度為2～3mg/mL；

優選地，所述IgM抗體檢測線上包被有抗人IgM抗體；

優選地，所述抗人IgM抗體的包被濃度為2～3mg/mL。

4.根據權利要求1-3任一項所述的試紙條，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上還設置有質控線；

優選地，所述質控線上包被有與膠體金墊上的標記抗體發生抗原抗體反應的二抗；

優選地，所述質控線上包被有抗兔IgG抗體；

優選地，所述質控線上的抗兔IgG抗體的濃度為2～3mg/mL。

5.根據權利要求1-4任一項所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條外包裝有塑料外殼；

優選地，所述塑料外殼上設置有加樣孔和觀察窗；

優選地，所述加樣孔位于所述樣品墊的上方；

優選地，所述觀察窗位于所述檢測線和質控線的上方。

6.一種新型冠狀病毒IgG和IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1-5任一項所述的試紙條；

優選地，所述試劑盒還包括樣本稀釋液；

優選地，所述樣本稀釋液為含有酪蛋白和ProClin的PBS溶液；

優選地，所述酪蛋白在所述PBS溶液中的濃度為0.2％～2％；

優選地，所述ProClin在所述PBS溶液中的濃度為0.02％～0.2％。

7.一種權利要求1-5任一項所述的試紙條的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)采用膠體金分別標記核衣殼蛋白、棘突蛋白和兔IgG抗體，將得到的膠體金標記核衣殼蛋白、膠體金標記棘突蛋白和膠體金標記兔IgG抗體混合后形成膠體金金標復合物，將膠體金金標復合物復溶和濃縮后，噴涂于膠體金墊上；

(2)在硝酸纖維素膜上分別包被IgG檢測線、IgM檢測線和質控線，烘干；

(3)將樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水紙順次搭接粘貼在底板上，得到所述試紙條。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述膠體金的粒徑為20～30nm；

優選地，采用膠體金標記核衣殼蛋白，所述核衣殼蛋白在膠體金溶液中的濃度為15～20μg/mL，標記時間不短于3h；

優選地，采用膠體金標記核衣殼蛋白，封閉液為0.1％～2％BSA，封閉時間為16～20h；

優選地，采用膠體金標記棘突蛋白，所述棘突蛋白在膠體金溶液中的濃度為15～20μg/mL，標記時間不短于3h；

優選地，采用膠體金標記棘突蛋白，封閉液為0.1％～2％BSA，封閉時間為16～20h；

優選地，采用膠體金標記兔IgG抗體，所述兔IgG抗體在膠體金溶液中的濃度為8～10μg/mL；

優選地，所述復溶的溶液為含有蔗糖、海藻糖、BSA和Tween-20的Tris溶液；

優選地，所述檢測線的包被液為PBS溶液；

優選地，所述質控線的包被液為PBS溶液；

優選地，所述烘干的溫度為30～37℃；

優選地，所述烘干的時間為1～4h。