[發明專利]用于早佳絲瓜雜交種子純度鑒定的SSR引物及方法

在審

• 申請號: 202010601289.8
• 申請日: 2020-06-29
• 公開（公告）號: CN111961740A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 韓小霞;胡新軍;李勇奇;閔子揚;袁祖華
• 申請（專利權）人: 湖南省蔬菜研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 長沙和雅知識產權代理事務所(普通合伙) 43238
• 代理人: 林傳貴

1.一種用于早佳絲瓜雜交種子純度鑒定的SSR引物，其特征在于，所述引物包括上游引物SF32和下游引物SR32，所述上游引物SF32的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物SR32的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一種早佳絲瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取早佳絲瓜親本以及雜交種后代基因組DNA；

(2)以所述步驟(1)提取的基因組DNA為模板，使用權利要求1所述引物SF32和SR32進行PCR擴增，得到擴增產物；

(3)對步驟(2)所述擴增產物采用凝膠電泳檢測，顯色，統計電泳結果；

(4)對步驟(3)所述電泳結果進行分析，同時具有親本特異性條帶的單株為雜交種，缺少其中任意一條帶則為假雜種。

3.根據權利要求2所述的一種早佳絲瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(1)中基因組DNA的提取方法具體為：將待提取樣品放入PCR板中，并加入0.25mol/L的NaOH溶液50μl，沸水中煮3min，用鑷子取出PCR板，加入0.1mol/L pH＝8.0的Tris﹒HCl 150μl中和反應。

4.根據權利要求2所述的一種早佳絲瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(2)中PCR反應體系為10μl，其中：10ng/μl基因組DNA 0.5μl，10×PCR Buffer 1μl，10mmol/l dNTP 0.1μl，20pmol/l SSR上下游引物各0.1μl，2.5U/μlrTaq DNADNA聚合酶0.1μl，加滅菌ddH₂O至總體積10μl。

5.根據權利要求2或4所述的一種早佳絲瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(2)中PCR反應程序為：94℃預變性4min，94℃變性30s，52.5℃退火30s，72℃延伸30s，共25個循環，最后72℃延伸3min。

6.根據權利要求2所述的一種早佳絲瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(3)中凝膠電泳為8％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。

7.根據權利要求2所述的一種早佳絲瓜雜交種子純度的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(3)中顯色具體為：電泳結束后，分開兩塊玻璃板，將凝膠放在專用盆中，加入蒸餾水清洗2-3遍后，放入染色液中，染色完成后取出膠板，用蒸餾水漂洗2-3次；將膠板放入顯影液中，輕輕搖動，待條帶清晰后，迅速用蒸餾水漂洗2-5遍后將膠板置于膠片觀察燈上，拍照記錄。

8.如權利要求1所述的SSR引物SF32和SR32在早佳絲瓜雜交種純度鑒定及分子輔助育種中的應用。