[發(fā)明專利]目的蛋白純化方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010598841.2
• 申請(qǐng)日: 2020-06-28
• 公開（公告）號(hào): CN113845560A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙雪冰;王妮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 佛山漢騰生物科技有限公司;廣州漢騰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K1/22
• 分類號(hào): C07K1/22
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 肖陽(yáng)

本發(fā)明提供了一種目的蛋白純化方法。該方法包括：利用洗脫緩沖液對(duì)親和層析柱進(jìn)行洗脫處理，以便獲得含有目的蛋白的洗脫液，所述親和層析柱加載有待測(cè)樣品，所述待測(cè)樣品中含有待純化目的蛋白，其中，所述洗脫緩沖液中含有醇類物質(zhì)。利用本發(fā)明提供的方法進(jìn)行目的蛋白親和層析，可以顯著提高洗脫蛋白質(zhì)的純度，抑制洗脫過程中多聚體的產(chǎn)生，提高蛋白回收率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種目的蛋白純化方法。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)適用于理化性質(zhì)差異較小而難分離的蛋白質(zhì)，親和層析利用固相介質(zhì)中的配基與混合生物分子之間親和能力不同而進(jìn)行分離，當(dāng)?shù)鞍谆旌弦和ㄟ^層析柱時(shí)，與配基能夠特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)就會(huì)被吸附固定在層析柱中，這種結(jié)合在一定條件下是可逆的，待親和層析結(jié)束后，可被洗脫緩沖液洗脫，而其他對(duì)配基不具有特異性結(jié)合能力的蛋白在上樣與洗滌過程中即通過柱體而流穿，不能結(jié)合于柱體上。蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)通過目標(biāo)蛋白質(zhì)與配體間特異性親和結(jié)合而達(dá)到分離純化的目的，具有生物專一性的特點(diǎn)。

但有些類型的蛋白尤其是Fc融合蛋白在酸性溶液中進(jìn)行蛋白親和層析純化時(shí)，容易形成聚集體甚至形成可見的沉淀，而造成純化后獲得蛋白的純度和回收率低。

因此，利用蛋白親和層析技術(shù)進(jìn)行蛋白純化的方法仍需要進(jìn)一步開發(fā)和改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種能夠抑制蛋白親和層析洗脫過程中多聚體的產(chǎn)生，提高目的蛋白的純度，提高目的蛋白回收率的方法。

在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種目的蛋白純化方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述方法包括：利用洗脫緩沖液對(duì)親和層析柱進(jìn)行洗脫處理，以便獲得含有目的蛋白的洗脫液，所述親和層析柱加載有待測(cè)樣品，所述待測(cè)樣品中含有待純化目的蛋白，其中，所述洗脫緩沖液中含有醇類物質(zhì)。發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，在洗脫緩沖液中加入醇類物質(zhì)，洗脫過程中不易產(chǎn)生蛋白多聚體，可大幅提高目的蛋白的純度。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述方法還可以進(jìn)一步包括如下附加技術(shù)特征至少之一：

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述醇類物質(zhì)包括甘露醇、木糖醇和乙二醇至少之一。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在洗脫緩沖液中單獨(dú)添加甘露醇、木糖醇和乙二醇均可顯著抑制洗脫蛋白質(zhì)多聚體的產(chǎn)生，可大幅提高目的蛋白的純度。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述醇類物質(zhì)在所述洗脫緩沖液中的體積分?jǐn)?shù)為1％-16％，優(yōu)選地，所述醇類物質(zhì)在所述洗脫緩沖液中的體積分?jǐn)?shù)為10％。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的方法，所述醇類物質(zhì)在所述濃度范圍內(nèi)，對(duì)蛋白多聚體的產(chǎn)生有較好的抑制效果。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述洗脫緩沖液包括檸檬酸緩沖液、乙酸鹽緩沖液和甘氨酸緩沖液的至少一種。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述洗脫緩沖液的pH為3-4。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述洗脫緩沖液的pH為3.4。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，加入醇類物質(zhì)的洗脫緩沖液在pH為3.4時(shí)能保障較高的回收率。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，使用預(yù)裝有中和液的容器收集所述洗脫液。現(xiàn)有技術(shù)中多在收集含有目的蛋白的洗脫液之后加入中和液進(jìn)行中和，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，相比較于該方法，使用預(yù)裝有中和液的容器收集所述洗脫液，能進(jìn)一步提高目的蛋白純度和回收率。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述待測(cè)樣品包括選自發(fā)酵液和細(xì)胞培養(yǎng)物的至少之一。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述親和層析柱為Protein A親和層析柱、Protein G親和層析柱或Protein L親和層析柱。